严防死守RNase[心得点评]

介绍防止RNAse污染的有效方法和注意事项

    虽说有的RNAi实验过程可以不涉及RNA，比如用载体表达shRNA，可是涉及RNA合成，后继的RNA纯化和定量RT-PCR，还是和其他涉及RNA的实验一样要求严格避免RNAse污染。痕量的RNase就可以严重破坏实验结果，不可不防－－
 
    实验用到的试剂和耗材如指管和移液枪头都要求是无RNase污染的，或者DEPC处理过的（注意含Tris的溶液不能直接用0.1%DEPC处理，详见Tips）。戴手套，不小心接触各种表面后，比如桌面啊，冰箱把手啊，门啊什么的，要勤换手套。

生物通ebioTips 3：DEPC（Diethyl pyrocarbonate）是强RNAse抑制剂。0.1%DEPC处理溶液或者器皿表面，可以通过共价修饰使RNase失活。DEPC按照0.1：100的比例加入试剂中，37度保温12小时，高温消毒15分钟可以除去DEPC残留，最后得到DEPC处理过的溶液，这个浓度对于一般的实验室内去RNase污染处理已经足够，对于RNase特别高的溶液则可能需要提高DEPC处理浓度。但是DEPC会和Tris的氨基反应而降解，失去灭活RNase的能力，所以不能用0.1% DEPC直接处理含有Tris的溶液。通常可以改用DEPC处理过的水来配置Tris溶液。已经配好的含Tris的溶液，可以用1%的DEPC处理以灭活RNase。不过过高的DEPC残留可能会影响后继实验。

生物通ebioTips 4：溶液残留的痕量DEPC会通过羧甲基化修饰RNA嘌呤基团，羧甲基化修饰RNA在无细胞体系中翻译效率非常低。不过除非大量的嘌呤基团被修饰，通常这种羧甲基化修饰RNA和DNA或者RNA之间的杂交性不受明显影响。所以，对于0.1%的DEPC，一定要100度加热处理15分钟以上去除溶液中的DEPC，再进行RNA相关实验。（节选）

    DEPC溶液主要用于处理容器和溶液中的RNase，对于工作台，加样器等较大面积的表面处理，一些去除环境中RNA酶污染的辅助产品更加适合，虽然不是必需的，可要帮助实验室严防死守RNase，还是挺好用的。RNA干扰属于探索性的研究，万一得不到预期的结果，到底是由于环境污染破坏还是由于实验设计上的问题，分析起来可就麻烦了，因小失大，耽误文章发表，甚至丢掉唾手可得的成果，岂不冤哉？
Ambion公司的RNaseZap和RNaseZap Wipes：一种含有3种有效成分的溶液，接触表面同时就能立即灭活RNase，对于不适宜烘干或者消毒的表面处理，比如工作台桌面，加样枪表面，或者其他玻璃表面、塑料表面，非常方便，喷一喷，擦一擦，轻轻松松除RNase。

    RNaseZap还可以用来处理指管表面，去除RNAse污染的同时也不会残留影响酶切反应的残基。RNaseZap有多贵？250ml要825（不能稀释的），4升7722人民币（2007年公开报价）。Wipes就类似浸透RNaseZap的湿巾，一筒100张，报价908。每次揪一张出来，直接擦拭表面就行，特方便，特适合工作台，加样枪，手套，门把手，电泳槽什么的。3筒补充装要2063。用一次要6块多到9块钱，不过与其出了问题花更多的试剂和精力去重复劳动来弥补漏洞，还不如一开始花费少点来预防。

生物通ebioTips 5：如何维持实验室无RNase污染？
• 经常定期处理各种表面，防止RNase污染。
• 实验全程戴手套，一旦手套触及其他
• 表面立即更换。
• 加样枪专用，
• 选择无RNase污染的指管枪头和试剂
• 减少RNA实验区通风或者空气流动

全文链接：生物通ebiotech专刊之《RNAi 5年回顾和技术宝典》