干细胞的研究利器[新品推荐]

胚胎干细胞具备分化成多种细胞类型的潜能，并被普遍认为有着重要的医疗前景。干细胞培养的质量决定了它有效产生分化细胞类型的能力，这可以通过对多能表型的分子标记的表达进行分析来测定。早期谱系限制性细胞的标记也能用于确定在干细胞培养物中是否存在分化的细胞，并能表明分化细胞所代表的谱系通路。生物通就为你推荐一些好的工具。

R&D Systems提供的人类多能干细胞评估引物对（货号为SC012，图1）可用于检测评估14种基因的mRNA转录本----这14种基因经常作为未分化细胞和早期谱系限制性人胚胎干细胞的分子鉴定标记。该产品还包含人类GAPDH的引物对，可作为对照用于验证cDNA合成是否成功。此外产品还包含了一个阳性对照。另外，R&D Systems还提供了这个试剂盒的小鼠/大鼠版本（货号为SC015）。

图1. 用干细胞多能和谱系限制的14种不同分子标记的引物对进行扩增，PCR产物进行凝胶电泳。用于扩增的cDNA来源于多种胚胎组织。条带3-6的标记（DPPA5/ESG1、Nanog、Oct3/4、SOX2）表达于未分化的胚胎干细胞，条带7-9是外胚层谱系（Nestin、Otx2、TP63），条带10-14是内胚层谱系（AFP、GATA-4、PDX-1、SOX17、HNF-3 beta），条带15是中胚层谱系（Brachyury），条带16包含生殖细胞的标记Stella。1，2.17-19条带都是对照。

R&D Systems还提供其他试剂来评估干细胞表型。例如，通过流式细胞仪来检测未分化的NTera2人畸胎癌细胞中Oct 3/4的表达（图2），通过免疫细胞化学来检测小鼠D3胚胎干细胞核中DPPA4的表达（图3）。

图2. 通过流式细胞仪对NTera2细胞中Oct3/4的表达进行评估。用大鼠抗人/小鼠的Oct3/3单克隆抗体（货号为MAB1759；橙色）或同型对照（货号为MAB0061；灰色）作为一抗，接着使用APC结合的二抗。

图3. 利用 R&D Systems的抗小鼠DPPA4多克隆抗体（货号为AF3730）和 R&D Systems Northern Lights™ 557结合的二抗（货号NL001）来检测D3细胞核中的DPPA4。

在干细胞的分离和扩增过程中，必须有办法能确定分离细胞的状态----最好能测定其分化能力。R&D Systems的间充质干细胞功能鉴定试剂盒（货号为SC010）能根据小鼠BMSC/MSC分化成多种间充质细胞的能力从而鉴定它们。这个试剂盒包含了特殊配方的培养基补剂，能有效诱导BMSC/MSC分化成脂肪生成细胞、软骨形成细胞或成骨细胞。试剂盒中还包含了一组抗体，包括羊抗小鼠的FABP4，羊抗小鼠的胶原蛋白II，以及羊抗小鼠的骨桥素，用于评估成熟细胞的表型。

   

图4. 小鼠间充质干细胞（MSC）的分化。小鼠间充质干细胞功能鉴定试剂盒（货号为SC010）用于诱导MSC分化形成脂肪生成细胞、软骨形成细胞或成骨细胞。利用试剂盒中提供的抗体包括抗-胶原蛋白II（A）、抗-FABP4（B）或抗骨桥素（C）来评估成熟细胞的表型。B和C中的细胞核由DAPI复染（蓝色）。