[新品推荐]QIAgenes表达试剂盒值得期待

优化重组人蛋白在大肠杆菌中的表达

    如果你想在大肠杆菌中表达人的基因，你会怎么做？从cDNA文库中扩增？提总RNA，做RT-PCR？克隆、测序？现在，这些繁复的步骤都不需要了。你只要拿到一个QIAgenes大肠杆菌表达载体，立即就可以开始诱导表达啦！PCR、亚克隆、测序，通通抛到脑后吧。

    最新的QIAgenes表达载体上含有完全测序的人类基因的cDNA，目前已有35,000个人类ORF的全长cDNA构建在载体上。为了在E.coli表达系统中得到最高产量的蛋白，QIAgenes大肠杆菌表达载体上的蛋白编码序列从密码子偏好性、mRNA稳定性及二级结构等多方面来考虑，通过专利的软件进行了优化。

QIAgenes大肠杆菌表达载体的特征：

*    T7启动子，在BL21(DE3)等菌株中高效表达；或用于基于E.coli的体外表达系统（如EasyXpress E. coli-based kits）

*    6组氨酸标签在Ni-NTA matrices上一步亲和纯化

*    卡那霉素抗性用于筛选

 

 

图1 QIAgenes表达载体的图谱

为高效表达优化编码序列

真核蛋白在原核系统上表达遇到的最大障碍就是细菌与哺乳动物细胞密码子的偏好性不同。另外，mRNA的二级结构可能也会影响翻译效率，减少蛋白产量。QIAgenes大肠杆菌表达载体上的蛋白编码序列根据E.coli密码子偏好性来进行优化，且消除了序列重复及其他可能产生mRNA二级结构的元素，使蛋白表达更加高效。

去除信号肽

在真核细胞中，糖基化的蛋白及分泌蛋白是由核糖体和内质网膜来合成的。这种类型的蛋白通常在N端有一个信号肽，通常包含13-36个疏水残基。在E.coli系统表达时，这段序列必须被去掉。在QIAgenes大肠杆菌表达载体中，NCBI数据库中的信号肽已经从蛋白编码序列中去除。

实验流程

在GeneGlobe数据库中选择你感兴趣的基因，订购，然后你就得到了直接用于转化的QIAgenes表达载体。再也不用做文库筛选、PCR扩增、亚克隆、克隆筛选、测序等一系列常规克隆的步骤。

 

纯化与检测表达蛋白

QIAgenes表达试剂盒包含Ni-NTA Spin Columns和Penta·His Antibodies，可快速有效地一步纯化和检测带His标签的重组蛋白。这个标签不仅优化用于E.coli表达，更可通过TAGZyme system有效酶切去除。

 

合成有翻译后修饰的蛋白

因为原核细胞缺少产生翻译后修饰所必需的酶和细胞器，如果这些修饰必不可少，那么只能在真核（哺乳动物或昆虫）系统中表达目的蛋白。QIAgenes（2008年下半年上市）将是一个很好的选择。它也是序列优化的，包含所有元件的即用型质粒，能在昆虫或哺乳动物细胞中高效表达翻译后修饰的真核蛋白。

 

表达膜蛋白

尽管在E.coli中异质表达人的某些膜蛋白也是可能的，但如果在真核系统中表达这种蛋白，成功的可能性会更大一些。因此我们推荐用QIAgenes昆虫/哺乳动物表达载体（2008年下半年上市）来表达膜蛋白。

 

应用

QIAgenes大肠杆菌表达载体能增加表达成功率，提高人类蛋白的异质表达量，用于功能分析、结构分析和相互作用研究。（生物通编辑余亮）