更快更高更强:QIAGEN Fast系列之提质粒[选购宝典]

QIAGEN提供资料

    奥运精神是更快，更高，更强，在实验室也不例外。快，在实验室里可以有3重含义：第一层当然是指速度，本来提一点质粒要20分钟，现在只要9分钟，就快了一倍；大量抽提超纯质粒本来要3-4个小时，现在只要几十分钟，可省下好几个小时干别的，此为速度快；第二层，实验做得快，结果又好，感觉自然很爽很痛快，心情也很好很愉快，所谓实验快了就快乐，第三层，每个实验步骤速度都加快一倍，结果自然也就更快出来，文章更快发表----像人家北卡的超级牛人张毅，6年发至少5篇Cell文章，4篇Science，4篇Nature和10篇以上Nature子刊的文章，那有多爽快呀。

    质粒纯化是分子生物学实验中最常用的技术之一。随着MiniPrep Spin一类的离心柱式的小规模质粒纯化系统的日渐推广，越来越多的同行们感受到试剂盒做质粒纯化的方便简单：只需要一台小型高速离心机，只需要不到30分钟就可以搞定。连以前需要氯化铯超速离心来纯化的大规模纯化质粒，都可以轻轻松松在1-2小时内全部搞定。难道还有更好的选择吗？Sure! 要知道技术的进步从不停止。核酸纯化领域的领头羊QIAGEN再次推出更快的新选择！既然已经花钱买Kit，何不选择更快一点？

小量提质粒

    QuickLyse Miniprep是Qiagen小量快速纯化质粒的又一新选择，彻底抛弃溶液1，2，3，只要一步----用裂解液重悬细胞沉淀，静置3分钟即变澄清，就可上柱----不再需要加溶液2和溶液3，不需要振荡混匀的小技巧，也不再需要离心，不考虑吸取上清会不会碰到沉淀......静置3分钟的悬液即变澄清，上纯化小柱离心，洗涤一次，最后洗脱，就完成整个提质粒的过程，全程9分钟！每次可从1.5ml细菌培养液中得到多至15ug的质粒，可用于测序，酶切和克隆等实验。QuickLyse其实源自eppendorf原来推出的快速质粒纯化试剂盒FastPlasmid，当时在中国市场上也颇受用户好评，后来eppendorf该项目被QIAGEN收购改良后再推出。要注意细菌培养液不要过多，菌体过多会影响裂解效果和纯化得率----纯化柱的载量只有15ug，对于高拷贝质粒，1.5ml细菌培养液已经足够，过犹不及。目前的价格是￥1620/100次。

毫克级大量快速质粒纯化

    用试剂盒小量提质粒实在太方便了，特别是一次提10多20个样品的时候。但是如果要很大量（毫克级别）规模的的质粒纯化，市面上原有试剂盒也还是不够方便----由于细菌沉淀体积大，处理溶液也要加得多，再溶液1，2，3的加上去，最后体积实在不小。以2.5升细胞培养液来算，加上溶液123后体积之和就有300毫升以上，非得大型的高速离心机才行。如果是过去的超纯质粒纯化系列是用重力柱吸附纯化，那还要等3-4个小时，最后洗脱得到的产物也需要再加异丙醇离心沉淀。谁都知道大型高速离心机操作很麻烦，等候时间也很漫长，说不定还要登记和排队，配平稍有偏差还会影响离心机的寿命。如果并不需要相当2次氯化铯超速离心的超纯质粒，那QIAGEN新出的CompactPrep Mega和Giga Kit就很简单了，不到40分钟就可以纯化得到2.5mg-10mg的高纯度质粒！

    QIAGEN原来的HiSpeed本来也很好用，因为用针筒式过滤器代替离心机除去溶液123后的沉淀，得到的上清液通过针筒式纯化过滤器，最后也不需要离心机就可以在短短45分钟内得到超纯的质粒。只可惜这个试剂盒是只有中量200ug和大量750ug的2种产量规格，没有更大的，再者这个试剂盒更适合1-几个样品手工操作，如果一次提取10多20个样本，这么一个一个的针筒过滤，肯定要累得抽筋的。样品数目一多就还是觉得离心机好。

    其实，真空抽滤比离心机更好用。速度快，使用方便，损耗小，费用低，也可同时进行多个样本操作，无需配平。QIAGEN推出的CompactPrep Mega和Giga Kit就是用真空抽滤代替大型高速离心机来进行多样本的超大规模质粒纯化。前面的溶液123处理后，溶液可以通过试剂盒提供的真空过滤器去除沉淀（真空泵自备），得到的上清再加入Binding Buffer，通过真空抽滤让质粒结合在纯化柱的滤膜上，洗涤2次后，将纯化柱插入试剂盒提供的50ml离心收集管里，5000转离心10分钟以甩干膜，最后加入1-5ml洗脱液，5000转离心洗脱。得到的产物浓度一般都在ug/ul以上。全过程只需要40-50分钟（Mega只要40分钟，Giga要50分钟），就算一次同时处理12个不同样品也一样快速！极为方便。

    提质粒虽然很简单，其实里面还是有些小技巧的，特别是混匀溶液1，2，3的过程。忽略技巧，小量提质粒往往结果就差那么一点点，大量提质粒就差得远了。如果经常做大量抽提质粒实验，你会发觉大量提质粒的得率不如小量的高，比如假设1ml细菌培养液可以提到10ug质粒，但是100ml培养液一般得不到1mg质粒。部分原因是大体积培养细菌生长和供氧不如小体积培养，更主要的原因是溶液1，2，3处理不够充分，技巧不过关。CompactPrep系列特别另外提供了LyseBlue指示剂，如果加入指示剂，溶液1悬浮细菌后加入溶液2就会变蓝，如果你看到溶液中局部还有白色部分，就需要再摇，摇，摇！直到全部变蓝，加入溶液3后蓝色又会褪去。如果还看到有蓝色痕迹，那么请继续滚摇！直到全部无色。然后需要静置10分钟让溶液3充分中和以提高得率。就这么简单，通过指示剂的提醒，就可以很技巧的使用试剂盒，得到更高的产量。

    试剂盒里纯化柱能更专一吸附质粒，得到的产物去除了RNA和基因组DNA污染，且内毒素含量很低。如果洗涤过程多洗一次能将质粒产物的内毒素进一步降低到1EU/ug以下，适合做转染实验，连敏感如Huh-7的细胞株也可以用。对于需要大规模纯化质粒，不要求超纯的话，QIAGEN的CompactPrep是顶好的选择。如果需要超纯级别，则需要选择ＱＩＡＧＥＮ原来的Ultrapure，或者Ｅｎｄｏｆｒｅｅ。（生物通编辑部）