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xCELLigence系统为GPCR监测另辟蹊径[创新技巧]

【字体: 时间:2008年06月25日 来源:生物通

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  最近,一系列研究展示了RochexCELLigence系统在功能筛选G蛋白偶联受体(GPCR)活性方面的优势。

最近,一系列研究展示了Roche的xCELLigence系统在功能筛选G蛋白偶联受体(GPCR)活性方面的优势,基于GPCR能够调节肌动蛋白细胞骨架和细胞粘附。这些实验利用能稳定表达人重组组胺1(H1)、血管加压素1a(V1a)、重组多巴胺1(D1)、降钙素和5HT1A受体(5-HT1A)的细胞系。GPCR代表了细胞膜蛋白的最大家族,参与跨膜信号转导。它们在调节多种生理机能如视觉、味觉、嗅觉以及电解液平衡、心血管功能和神经传递等方面扮演了重要角色。因此,这些受体是药物开发的重要靶点。目前市场上超过50%的药物都是针对GPCR开发的。

目前在自然和生理条件下测量内源GPCR的的功能激活的研究很少。因此,xCELLigence系统对于GPCR细胞水平分析的重要贡献就分为几部分。首先,无需在之前或之后标记细胞,节省了费用和时间。因为读数是实时而无损伤的,所以不需要裂解细胞。因此,同样的细胞可以在同一个孔中刺激多次来评估脱敏作用或与其他受体类型的干扰。检测方法不会受到内源化合物的影响,避免了在大部分光学分析中遇到的主要问题。基于这种实时技术,分析提供了整个分析阶段的全面数据,让研究者对配体添加的时机做出有依据的决定。此外,实时动态的读数还提供了关于信号通路激活的简明而有价值的信息。

另外,除了与G蛋白的Gq亚族偶联的组胺受体,细胞表达的与Gs和Gi家族偶联的其他受体也可以用xCELLigence系统来监控。更重要的是,表达内源GPCR的细胞包括原代细胞也可以利用这项技术,而不需要内源GPCR的过表达或改造细胞去表达异源的G蛋白。这样就可以评估生理上适当的细胞类型中的受体。

xCELLigence系统提供了细胞增殖和活力的非标记的、实时动态监测。这项技术利用生物电阻读数来非主观性地实时量化细胞状态。细胞接种在E-Plate微量滴定板中,在每个孔的底部有嵌入的微电子感应器。细胞与微电极表面的相互作用产生了细胞-电极阻抗反应,它不仅表明了细胞活力,还与接种在孔中的细胞数量有关。

如果你还想了解xCELLigence系统技术的更多信息,请访问www.xCELLigence.roche.com

(生物通 余亮)

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