2008生物通技术评之反转录酶专题二：热销反转录酶大盘点[选购宝典]

很多公司都推出了自己特色的反转录酶和反转录试剂盒。这次就先给大家介绍热销的几种反转录酶，了解产品再结合自己的实际，才能选出适合自己的产品。一步法和两步法的试剂盒下回再说。

续前 ·2008生物通技术评之反转录酶一:反转录酶的选择要诀

 

Roche

    除了常规的AMV和MMLV、扩增长片段（13.5kb）的Expand反转录酶之外，Roche新推出了一种Transcriptor High Fidelity反转录酶。这种Transcriptor高保真反转录酶是一种混合酶，含有经过基因重组的反转录酶及具校正调节功能的酶。两种酶的协同作用使得其混合酶在转录RNA模板时可以获得比其他常用转录酶高7倍的保真度；而且这个酶反应速度超快，10分钟就能完成cDNA合成，节约了足足50分钟。

 

■ 高灵敏度转录 : 起始转录模板RNA的量最少为10 pg，可同时对低丰度和高丰度的RNA 进行转录，而不影响基因表达的水平。

■ 提升准确性  : 7倍于常用普通转录酶的保真度。

■ 高产量全长cDNA : 使用oligo(dT)₁₈ 引物，可获取最长14kb的转录产物。

■ 快速获得结果 : 反应速度更快，10分钟内就可完成全长cDNA的转录过程。

■ 转录温度高：转录温度高达55°C，可转录复杂二级结构的模板

 

 

      如果你后续想做基因克隆、表达、测序，或者是构建cDNA文库，选择Transcriptor就没错了，不但可以省时省事，还可以省钱呢，不用反复摸索实验条件，快速得到结果，高保真反转录减少转录出错而导致实验失败的可能，节约重复实验的费用。生物通编辑留意到现在还有6折优惠呢，50次反应的优惠价是1558元，单次反应成本仅需要31元，性价比相当高。同时上市的还有Transcriptor第一链合成试剂盒，包含了cDNA合成所需的所有成分，包括蛋白酶抑制剂、引物、阳性对照等，非常方便。不过，促销有时限，6月30日截止，要囤货就要抓紧时间哦。

 

 

Invitrogen

      Invitrogen公司的SuperScript是最知名的反转录酶之一，可谓“莫愁天下无知己，天下谁人不识君”。现在，Invitrogen还模仿英特尔公司，搞了一个“SuperScript Inside”，让大家更加熟悉这个商标。从SuperScript I、II到SuperScript III，性能也在不断升级。SuperScript III是SuperScript II更加热稳定的突变体，在50℃半衰期长达220分钟，使cDNA产量更高，并能够增加基因特异引物的特异性；且没有RNase H的活性，有利于得到更多全长的cDNA，最长的cDNA产物片段超过了12kb。如果你的RNA模板GC含量较高或有二级结构，选它就没错了，最高可以在55℃进行反转录。如果你的样本量少也没关系，它的模板最低只要10pg总RNA就够了（对于高丰度管家基因，仅需0.1pg起始总RNA就可以用这个反转录酶检测出来！）。SuperScript III以预混合各组分后冻干的形式提供，不单减少重复加样而可能引起的偏差和污染，操作简单省事，更可在室温下稳定保存长达一年的时间，非常安全方便，适合囤货哦。你可能会说，是很好啊，就是价格太贵了。不怕，现在有促销呢，10000U的SuperScript III价格在2000元左右，单次反应成本约在40元。而且现在购买SuperScript系列产品还可以获得可爱的泰迪熊一个呢。另外，Invitrogen还提供II代的SuperScript（价格比III代的便宜）和美国生产、中国分装的MMLV，10000U只要429元，据使用者反映效果还相当不错。

 

      Invitrogen另外提供Thermo-X™ RT逆转录酶，是克隆自一种嗜热真细菌，提供高达70℃的热稳定性，因而即使是最具挑战性的模板也可以进行有效的RT-PCR。

 

 

Promega

      提到反转录酶，一定要提到Promega。它的MMLV和AMV应该是最早占有反转录市场的产品了吧，到现在市场占有率还很高，算是最经典的反转录酶产品了。其中点突变和缺失突变去除RNase H活性的MMLV，产生的cDNA产量和长度能更好，可用于5kb以上的cDNA片段合成。而Promega的价格也很容易为大家接受，10000U 的MMLV(50次)价格为410元，点突变MMLV（50次）只需要800元，每次反应只需要16元，相当于其他进口品牌的1/3-1/2，难怪那么多人一直青睐它。而AMV对温度的适应性更广，在37-58°C都可以进行反应，有利于二级结构的消除，适合复杂模板；同时其反转录效率更高，产量更大。

 

      ImProm-II^TM逆转录酶是Promega推出的升级产品，适用于低丰度(最低至10个拷贝)或大片段RNA的反转录反应（模板片段可达13kb），性能相当强悍。Promega的反转录产品在进口试剂中以其最高的性价比而受到广泛的欢迎。

 

 

Qiagen

      Qiagen的反转录酶有两种：Sensiscript和Omniscript，主要的区别是针对的模板量不同。它们不是来源于MMLV或AMV，是一种独特的反转录酶。Omniscript适合扩增50ng-2ug的RNA，逆转录活性高，产率高，而Sensiscript则顾名思义，适合更少量的RNA（< 50ng）的高灵敏反转录，哪怕只有一个细胞、RNA的量只有1pg或者基因在细胞中只有10个拷贝，也能得到很好的RT-PCR结果。而对于病毒RNA的反转录，则通常会选用Omniscript，因为在病毒RNA的制备过程中，通常会有carrier RNA的存在。另外，Sensiscript和Omniscript的一个特点就是与RNA模板的亲和力非常强，与普通的MMLV或AMV相比，Sensiscript和Omniscript在碰到复杂二级结构模板时并不脱离，依然打开并通读复杂模板的二级结构。配合Buffer特有成分，令高GC含量或者带有复杂二级结构的RNA模板都可以迎刃而解。只需在37-42℃反应，不需要高温，不影响酶的活力和产率，得到更高产量的cDNA。但Qiagen的这两种反转录酶都是有RNase H活性的，可能会对cDNA产物的长度有一定影响（适于< 4.5kb的模板）。转录后，无需再特别加入RNase消化RNA，减少了操作时间的同时还降低了成本。Omniscript的价格是50次2020元，Sensiscript则贵一点，是50次2220元，不过这里面都包含了dNTP和RNase-free water哦，又可以少买两样东西了。价格未计算折扣在内。

 

      QIAGEN还有为定量PCR专门优化的反转录试剂盒，因为定量产物长度有限，反转录反应时间可缩短到10-20分钟，效率高，速度相当快。如果你要做短片段或者定量RT-PCR，大可不必费心考虑超长片段反转录试剂。

 

 

Stratagene

      Stratagene以前的Stratascript反转录酶又便宜又好用，可惜后来停产了，取而代之的是AccuScript和AffinityScript。AccuScript在2006年上市，是当时市场上第一个高保真的反转录酶。它来源于MMLV，同时还混合了一种具有校正功能的3’-5’外切核酸酶，因此保真度比其他的反转录酶高3-6倍。如果你需要做基因克隆、蛋白表达等对保真度要求高的实验，选择这个AccuScript，再加上一个保真度最高的PfuUltra II DNA聚合酶，那就perfect了。而且这个酶可以扩增长达20.8kb的cDNA，应该在扩增长度上是最厉害的了。试举一例，记得N年前湖医某大哥做RACE时怎么做结果都不对劲儿，折腾了5个月楞是说RACE试剂盒有问题，最后Northern证实他要扩的片段长达17-18K（具体数字忘记了）以上，已知片段又偏偏在3‘端，当时试剂盒配的反转录酶一次扩不了那么长，真是折腾掉不知几多精力和财力啊。所以对于潜在的未知超长片段，AccuScript绝对首选。AccuScript适用反应温度为37-42°C，扩增起始模板量10ng-5ug RNA。如果模板特别复杂或者量很少的话，不妨选择另外一种AffinityScript，它可以在37-55°C这个范围内扩增低至1ng的RNA，cDNA长度同样可以达到20kb。如果你有多种模板，每个的最适温度都不同，那么只需要AffinityScript就可以了，非常灵活。不过这两种反转录酶的价格都不菲，现在7折优惠，AccuScript的优惠价是2509元/50次，AffinityScript则是2392元/50次，单次价格成本都在50元左右。

 

 

NEB

      30多年来专业做酶的NEB，除了鼎鼎大名的限制性内切酶，也提供MMLV反转录酶。它的MMLV适用模板为0.5-2ug 总RNA，在42°C反转录，cDNA片段长度最长可达到13kb呢。不过价格跟上面的进口产品相比，算是很平易近人了。10000U（50次）只需要629元。

 

 

TaKaRa

      宝生物最近新推出了一种无RNase H活性的MMLV反转录酶，可从1ng-1ug总RNA中合成长达10kb的cDNA片段。虽说没有特别的优势，但是胜在价格超便宜，50次的只需要380元，现在还有买一送一的优惠，单次反应只需要3.8元。如果你的样品足够，常规扩增要求不高的话，这是经济的选择。

 

Tiangen

    Tiangen作为Qiagen的子公司，产品特性当然也要向它看齐了。Tiangen的Quant反转录酶就与Qiagen的OmniScript特性相似，不是MMLV或AMV，是一种利用大肠杆菌重组表达的全新高效反转录酶。它适合扩增50ng-2ug的总RNA，最大特点也是与RNA模板的亲和力强，即使在37°C反应，也能通读GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。性能好，价格当然也不菲，50次的价格在1500元左右。不过，现在购买包含Quant酶的一步法RT-PCR试剂盒却相当划算，50次只要910元，还包含了高效扩增的Hotmaster Taq DNA热启动聚合酶和其他试剂，并降低了污染和RNA降解的风险。如果你只是做常规的反转录的话，还有一种TIANScript MMLV反转录酶适合你。这个酶经过修饰，RNase H活性很弱，适用于较长（>5kb）的cDNA合成，且50次只需要450元，相当实惠。

 

综上，我们做了一个反转录酶排行榜：

特点	最佳反转录酶
反应温度	Thermo-X™ RT 70° C(特殊要求); SuperScript  III (Invitrogen)/ Transcriptor (Roche) / AffinityScript (Stratagene)/AMV 55°C
灵敏度	Sensiscript (Qiagen) 1pg-10copy，ImProm-II (Promega) 10pg -10copy SuperScript III (Invitrogen)0.1-10pg/ Transcriptor (Roche) 10pg
保真度	Transcriptor (Roche) 7倍  AccuScript 3-6倍
片段长度	AccuScript & AffinityScript (Stratagene) 20kb
反应速度	Transcriptor (Roche) 10min
便宜	MMLV (TaKaRa) 每次反应 <￥10

 

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生物通 余亮 吴青

 

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