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细胞计数与活力分析中的好帮手[选购宝典]

【字体: 时间:2008年08月18日 来源:生物通

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  是不是很讨厌你的血球计数板,是不很每次细胞计数都搞得头晕眼花?在这个讲究速度和效率的时代,你似乎有些大材小用了。这些简单的工作就留给细胞计数仪去做吧。计数的同时还能分析细胞活力呢。

你是怎么样进行细胞计数的?看着显微镜,拿着计数器,1、2、3……直到200?数完之后似乎有点头晕眼花,结果还不是很准确。在这个讲究速度和效率的时代,你似乎有些大材小用了,应该把时间花在更有意义的事情上。这些简单的工作就留给那些细胞分析计数仪去做吧。

现在已经有了很多种能自动完成细胞计数的仪器,同时还能分析细胞活力、细胞大小、细胞的生长曲线等等。而且,这些仪器既准确、简单、快速,不需要对样品进行稀释,也几乎不需要清洗,把你从那些繁重的体力劳动中解放出来。谁说做生物实验一定是体力劳动,我们也可以成为脑力劳动者。

通用电气(GE Healthcare)最近就推出了一款非常小巧的全自动细胞计数分析仪—Cytorecon。该仪器采用了高分辨率的CCD成像技术及自动软件分析功能,可以快速完成包括贴壁细胞、悬浮细胞、白细胞、培养细胞、酵母细胞等细胞样品的计数和浓度计算,结合台盼蓝染色技术,还可以快速完成细胞存活率的分析。除了细胞样品以外,它还支持一些细菌和微生物样品的浓度计算。


在进样的设计上,Cytorecon采用了20孔的特制样品盘设计,只需要用移液枪在样品盘上点上样品,即可完成细胞计数和浓度计算。而且样品需要量非常少,只需要11ul,即使是非常珍贵的样品也不用担心浪费啦。另外,在手工进行细胞计数时,大部分细胞需要先稀释再计数。现在有了Cytorecon,即使细胞浓度超过107个/ml,也无需稀释就能完成浓度分析。它内置了多种细胞分析模型,能准确测定附着在一起的细胞。

仪器可连续对20个样品进行拍摄和计数。每个样品拍摄6个视野,并自动计算细胞总数和细胞浓度。样品盘每个孔均为一次性使用,避免样品交叉污染,也避免传统细胞计数仪器的进样针会堵塞的麻烦,无需清洗和维护。便携的样品盘也易于长期保存,样品少时可以分多次使用,一方面提高了灵活性,而另一方面也大大降低了成本。

Cytorecon内置了方便上手的控制分析软件,通过简单的参数设置就可以设定拍摄的样品数量,以及完成细胞的计数、浓度计算和活力分析。有了如此方便的帮手,相信细胞计数将会变得无比轻松,您再也无需枯燥地对着显微镜,以损耗视力作为代价一个一个进行细胞计数了。

说到细胞计数仪,就一定不能不说库尔特了。最初库尔特公司设计的电子计数系统应用最为广泛。它的原理是细胞在流经一个精细的管子时,会增加流过这一管子的液体的电阻,所产生的一系列脉冲就可以被分类和计算。但是如果只是单纯的计数,死细胞和细胞碎片就不能被区别开来,会产生一定的误差。只有结合了细胞活力的数量才有意义,因此新的细胞计数仪还具有测量细胞活力的功能。

贝克曼库尔特的细胞活力分析仪——Vi-CELL系列,扩展了流式细胞仪的功能又承继了库尔特计数仪的特色与实用性。它应用目前广泛认可的台盼蓝染料排斥法(Trypan Blue Dye Exclusion Method)的原理,结合先进的CCD(电荷耦合器)成像技术,几分钟就能完成细胞计数,并得到具有统计学意义的更多参数。

台盼蓝这种染料在正常情况下不能透过细胞膜,进入细胞。当细胞死亡(失去活力)时,其细胞膜因破损而被台盼蓝染料透过。死亡的或失去活力的细胞因为吸收了染料,其色调比有活力的细胞(活细胞)要暗淡。对该种色调明暗的对比进行测量, 即可判断细胞的活力。



 

如果使用最新的Vi-CELL XR,您只需加入0.5 ml左右样品到试管,放进试管槽即可,加样时不必绝对准确,仪器会自动准确无误地完成取样过程。样品的取样、染色自动完成,不再依赖人手,避免人为误差。若配合12位的全自动的样品输送器,只须将测试的样品试管放入槽内,仪器即可自动依次将样品管连续旋转输送至工作位置,开始分析。你可以去休息一下,或处理更重要的事情,直到样品分析完毕。

Vi-CELL还可以与培养箱或生物反应器配合,实时监测细胞培养过程。以往你要人工观察细胞的反应过程,人手收集大量的原始数据,分类、整理、保存、提取、比较等等都要花去许多宝贵的时间。费时费力,而且容易出错。Vi-CELL不但能实时监测细胞的状态,还能记录和储存整个生物反应过程的所有数据,并自动描绘生物周期的生长曲线。通过Vi-CELL简单的软件操作界面,你可以随时调出任意时刻的相关数据和图像,如生长速度、倍增时间、存活率、存活细胞浓度、存活细胞的直径分布等。

Vi-CELL XR检测细胞的下限从原来的5 微米降到2微米,可以分析酵母或者更小的细胞。与Vi-CELL S和Vi-CELL AS相比,在很多功能上都有所改进:具有自动对焦功能,使用更方便;图像放大6.75倍,你可了解所关心的某一图像的细节之处;环状测量使细胞碎片分离;取样和混匀的过程不再是固定的,可以调节,因为有些细胞系比较脆弱,而有些又很粘稠,这种因细胞而异的做法能改善分析的结果。

丹麦ChemoMetec A/S公司也开发了NucleoCounter系列细胞计数的仪器,可以对哺乳动物细胞、酵母细胞,精子和牛奶中体细胞这四种类型的细胞进行计数。它的技术原理是基于ChemoMetec荧光显微镜、CCD成像和荧光染料PI(碘化丙啶)。

NucleoCounter Mammalian 计数仪的核心是内置的荧光显微镜设计,包括LED激发光源,光学元件和CCD,能检测与核酸结合的荧光染料PI发出的信号。PI是一种荧光分子和高选择性的DNA染料。它不能通过具有完整细胞膜的活细胞,死细胞因膜破损,可被PI染成红色。因此如果要测定死细胞浓度,可以直接将样品送进去分析。不过想要测定总细胞浓度的话,在分析之前就要先裂解样品,比其他的分析仪多了一个将样品与裂解液和稳定液混合的步骤。细胞的大小与分析无关,因为它测量的只是发荧光的细胞核,所以在测量过程中也不必选择特定的细胞类型。NucleoCounter的分析过程还挺快,按下“Run”键,30秒之后就会在屏幕上显示结果。不过每次只能分析一个样品。

NucleoCounter还有一个秘密武器就是一次性的NucleoCassette板。NucleoCassette包含整个流路系统和分析室,而且PI固定在它的内部,因此样品分析后丢弃即可,不需要清洁和维护。每块NucleoCassette分析室的厚度都经过严格检测,可精确决定每个测量的分析体积,因此NucleoCounter也无需校正,相当省心。

(生物通 余亮)


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