iFOLD蛋白重折叠三兄弟[新品推荐]

【字体: 时间:2009年10月20日 来源:生物通

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  默克旗下Novagen开创性地推出了iFOLD 蛋白重折叠系统。这三兄弟各带有一块96孔板,上面分别有92、94和91种独特的缓冲液。这些缓冲液成分是根据REFOLD数据库和众多成功重折叠的文献而确定的,内含特定pH值、盐、环式糊精、氧化还原试剂以及重折叠添加剂的不同组合。该系统也是2009年度生命科学十大创新产品评选活动的候选产品之一。

俗话说,巧妇难为无米之炊,蛋白质的结构与功能研究当然也离不开大量的高纯蛋白。要想获得大量蛋白,娇贵的哺乳动物细胞可很难做到,主要依靠大肠杆菌表达系统,操作简单,价格便宜量又足。然而,大肠杆菌中生产的外源蛋白量是不少,却常常形成包涵体,让人欢喜让人忧。虽说包涵体也有不少优点,诸如易纯化、耐蛋白水解等,但要想摸索出合适的条件,让包涵体重折叠成天然的构象,自然少不了一番周折。如果能同时筛选多个重折叠条件,那将会节省不少时间,且增加成功的几率,起到事半功倍的效果。

默克旗下Novagen就开创性地推出了这样的系统——iFOLD 蛋白重折叠三兄弟。这三兄弟各带有一块96孔板,上面分别有92(老大)、94(老二)和91(老三)种独特的缓冲液。这些缓冲液成分是根据REFOLD数据库(http://refold.med.monash.edu.au)和众多成功重折叠的文献而确定的,内含特定pH值、盐、环式糊精、氧化还原试剂以及重折叠添加剂的不同组合。

iFOLD三兄弟中的老幺是在去年底上市的,它的独特之处是采用全新的化学试剂—FoldACE—作为主要的复性添加剂。这个FoldACE试剂是什么来头?有什么好处呢?它是从一个能增加蛋白回收率的化学试剂库中筛选出来的。FoldACE试剂共有五种,每一种都是水溶性的有机盐,分子量小于500 Da。它们不是去污剂,也不会形成胶束。在蛋白复性之后,FoldACE试剂可以通过金属螯合亲和层析或分子筛的方法有效去除,透析或超滤也可以。实验表明,它们能显著增强某些蛋白的折叠效率。

除了FoldACE试剂,iFOLD 3系统复性缓冲液的pH缓冲液成分也是五选一,分别是Bis-Tris、MOPS、HEPES、EPPS和TAPS。孔中还包含了还原剂(TCEP)或谷胱甘肽氧化还原缓冲液。iFOLD 3能根据不同的缓冲液、pH值、氧化还原剂和FoldACE试剂的组合,筛选一个蛋白的91种复性条件(91个实验孔和5个对照孔)。

点击索取iFOLD重折叠系统的更详细资料!

筛选流程如下:
起始物质:包含目标蛋白的细胞 → 收集细胞 → 超声裂解细胞,并加入Lysonase生物处理试剂 → 离心收集包涵体 → 用Triton X-100洗涤包涵体 → 用盐酸胍变性包涵体 → 用iFOLD 3平板快速复性目标蛋白 → 用D-Tube96 透析器透析缓冲液 → 分析复性蛋白

iFOLD 蛋白重折叠三兄弟的比较:

 

iFOLD 系统1

iFOLD 系统2

iFOLD 系统3

包涵体洗涤剂

1.0% Triton-X-100

0.125 M NDSB-201 (Triton X-100)

1.0% Triton-X-100(或NDSB-201

包涵体变性剂

4.4% N-lauroylsarcosine

7.0 M GuHCl(或8.0 M 尿素)

7.0 M GuHCl

包涵体还原剂

5 mM TCEP

10 mM TCEP

1.0 mM TCEP 1

5.0 mM TCEP 2

6.0 mM + 4.0 mM GSH + GSSG 1

8.0 mM + 2.0 mM GSH + GSSG 2

9.5 mM + 0.5 mM GSH + GSSG 3

变性的目标蛋白浓度

1 mg/ml

5 mg/ml

10 mg/ml

每孔中的总蛋白

50 ug

50 ug

100 ug

缓冲液体积(50 mM

Tris-HCl, pH 7.0, 7.5, 8.08.5

MOPS, pH 7.0

HEPES, pH 7.5

EPPS, pH 8.0

TAPS, pH 8.5

CHES, pH 9.0

Bis-Tris, pH 6.0

MOPS, pH 7.0

HEPES, pH 7.5

EPPS, pH 8.0

TAPS, pH 8.5

重折叠添加剂

100 mM NaCl

250 mM NaCl

1.0 mM TCEP

3.8 mM GSH + 1.2 mM GSSG

1.0 mM EDTA

1.0 mM CaCl2 + 1.0 mM MgCl2

0.5 M GuHCl

20% glycerol

0.1% PEG6000

0.5 M L-arginine

12.5 mM 环式糊精

24 mM NaCl + 1.0 mM KCl

240 mM NaCl + 10 mM KCl

1.0 mM TCEP

9.0 mM GSH + 1.0 mM GSSG

6.0 mM GSH + 4.0 mM GSSG

1.0 mM EDTA

0.25 mM each of CaCl2, MgCl2, MnCl2 & ZnCl2

0.5 or 1.0 M NDSB-201

0.5 or 1.0 M NDSB-256

1.5 M sorbitol

0.58 M trehalose

0.06% PEG3350

0.5 M L-arginine

10 mM 环式糊精

FoldAce试剂1

FoldAce试剂2

FoldAce试剂3

FoldAce试剂4

FoldAce试剂5

iFOLD系统的特征包括:

  • 覆盖近300个重折叠条件
  • 包括纯化包涵体的所有试剂
  • 含有96孔板重折叠缓冲液矩阵
  • 测试pH范围在7.0-9.0之间
  • 重折叠添加剂包括盐、环式糊精、氧化还原剂、;离液盐、NDSB和独特的FoldACE试剂
  • 重折叠条件基于众多文献和REFOLD数据库

有了iFOLD重折叠三兄弟的帮助,相信枯燥冗长的实验摸索可以很快完成,并让你迅速走上蛋白结构与功能研究的光明大道。(生物通 余亮)

2009生命科学十大创新产品评选火热登场,赶快去参加吧。

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