一步到位缓解模板少的难题 新款RT-PCR试剂盒

CellAmpTM Whole Transcriptome Amplification Kit（for Real Time），从少数细胞（数个～200个左右）起始，不需要进行RNA和cDNA的精制，即可直接进行高效率的cDNA扩增或对几个基因进行Real Time PCR解析。它也是2009年度生命科学十大创新产品评选的候选产品之一。

　　

CellAmp^TM Whole Transcriptome Amplification Kit（for Real Time）

 

创新点：从少数细胞（数个～200个左右）起始，不需要进行RNA和cDNA的精制，即可直接进行高效率的cDNA扩增或对几个基因进行Real Time PCR解析。

 

特点：

从少数细胞（数个～200个左右）起始即可直接进行高效率的cDNA扩增。

从少数细胞起始即可对几个基因进行Real Time PCR解析。

操作简便，不需要进行RNA和cDNA的精制。

可以对微量的RNA进行cDNA扩增。

 

对于细胞数量非常有限的样品来说，定量RT-PCR是研究其中基因表达模式的常用方法。然而，由于样品量少或者非常珍贵，在纯化过程中的样品损失和产率的影响尤为关键，因此少量细胞的RNA的分离纯化成为令人困扰的问题。

TaKaRa的CellAmp^TM Whole Transcriptome Amplification Kit（for Real Time）是从少数细胞直接反转录合成cDNA，然后对反转录的cDNA进行扩增的试剂盒。扩增的cDNA可以作为Real Time PCR的模板使用。通常情况下，进行微量核酸提取时，纯化过程中核酸会有所损失，使用本制品不需要对细胞RNA和反转录的cDNA进行纯化，即可对反转录的cDNA高效扩增。

使用CellAmp^TM Whole Transcriptome Amplification Kit（for Real Time），首先溶解细胞，然后使用dT Adaptor Primer（RT dT Primer）进行反转录反应，由mRNA合成cDNA，通过TdT酶对合成的cDNA进行dA加尾反应后，以此作为模板进行PCR反应扩增cDNA。

 

操作简便，不需要进行RNA和cDNA的精制。从少数细胞起始即可对几个基因进行Real Time PCR解析，一次反应得到的cDNA可以进行2,000次以上的Real Time PCR解析。

操作流程如下：

CellAmp^TM Whole Transcriptome Amplification Kit（for Real Time）除了能从极少数细胞直接进行cDNA扩增外，也可以对微量的RNA进行cDNA扩增。

 

实验例：按照CellAmp^TM Whole Transcriptome Amplification Kit（for Real Time）的操作方法，分别使用小鼠细胞（2、20、200个）以及小鼠Total RNA（20 pg、200 pg、2000 pg）作为起始材料进行cDNA扩增，将扩增得到的cDNA 10倍稀释后，取2 ml作为Real Time PCR的模板，进行Real Time PCR反应，检定Mouse Rplp1基因。Real Time PCR反应使用了SYBR^® Premix Ex Taq^TMⅡ（Perfect Real Time）（TaKaRa Code：DRR081）试剂盒；Real Time PCR仪使用了Thermal Cycler Dice^® Real Time System（TaKaRa Code：TP800）。

 

起始材料：小鼠细胞

 

 

起始材料：小鼠肝脏来源的Total RNA

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

上图为使用Real Time PCR进行Mouse Rplp1基因的检出结果。分结果显示，使用CellAmp^TM Whole Transcriptome Amplification Kit（for Real Time）能够进行高效率的cDNA合成和扩增，使用少量的细胞或Total RNA进行cDNA的合成和扩增后便可以有效地进行Real Time PCR反应。