多功能 通用型 EmeraldAmp™ PCR Master Mix

　　

创新点：EmeraldAmp™实现通用性强、简单方便的PCR扩增反应，PCR反应液呈艳绿色，可以直接进行电泳，并且对GC rich模板也能进行良好扩增。

特点：
对GC rich模板也能进行良好扩增。
操作简便的预混型制品。
可以进行Hot Start PCR反应。
PCR反应液呈艳绿色，电泳时指示效果明显。
PCR扩增产物可以直接进行电泳。

EmeraldAmp™ PCR Master Mix是PCR反应用各种试剂（酶、Buffer、dNTP Mixture等）的2倍浓度的预混型制品。DNA Polymerase使用了性能良好的Hot Start酶。使用本制品时，只需要在制品溶液中加入模板和引物便可进行PCR反应，简化了操作步骤，减少了PCR操作过程中的污染。并且，本制品中已含有电泳时所必需的色素试剂（蓝色和黄色色素），PCR反应后可以直接进行电泳。反应液为鲜艳的绿色（Emerald Green），电泳时指示效果明显，容易观察样品的电泳位置。
使用EmeraldAmp™ PCR Master Mix扩增得到的PCR产物3′端附有一个“A”碱基，可直接克隆于T-Vector中。EmeraldAmp™ PCR Master Mix对GC Rich模板也能得到良好扩增，以人基因组DNA为模板可以扩增10 kbp的DNA片段。

PCR反应性能
以人基因组DNA为模板，可以很好扩增8.5 kbp的DNA片段。

电泳时色素Marker位置
反应液5 ml，1% Agarose电泳时，蓝色色素在3～5 kbp附近，黄色色素在50 bp以下位置。

通常PCR反应使用量
1. 按下列组份配制PCR反应液。

EmeraldAmp™ PCR Master Mix 25 ml
模板DNA*   X ml
引物 1（20 mM） 0.5 ml
引物 2（20 mM） 0.5  ml
灭菌蒸馏水              Up to 50 ml

*【50 ml PCR反应体系中模板DNA推荐使用量】
人基因组DNA  50 ng～100 ng
质粒DNA 1 pg～1 ng

2. PCR反应条件。
3 Step PCR
98℃     10 sec
55℃ or 60℃*  30 sec      
72℃ 1 min/kbp
30个循环

* 扩增GC Rich模板时，退火温度可以使用60℃。
2 Step PCR
98℃ 10  sec
68℃ 1 min/kbp*    

30个循环

* 延伸时间设定在15 min以上时，扩增产物有时会产生Smear现象。

应用例
将插入5 kbp以上DNA片段的pUC118文库进行转化，对大肠杆菌菌落进行阳性克隆的筛选。

电泳结果如下：

1~8：菌落PCR反应液           
M：λ-Hind III digest DNA Marker   

1% Agarose；5 ml电泳

通过电泳确认插入片段大小，选取PCR产物与目的片段大小一致的阳性菌落。