生物通 | 新技术专栏

体外蛋白表达Q&A[创新技巧]

【字体: 时间:2009年11月19日 来源:Promega

编辑推荐:

  Promega公司的TNT® 快速系统可方便地进行真核生物蛋白质体外表达,是在单管内进行的偶联的转录/翻译反应。与标准的兔网织红细胞裂解液系统相比,创新的TNT® 偶联的兔网织红细胞裂解液系统简化了步骤,减少了获得体外翻译的结果所需的时间。

Promega公司的TNT® 快速系统可方便地进行真核生物蛋白质体外表达,是在单管内进行的偶联的转录/翻译反应。与标准的兔网织红细胞裂解液系统相比,创新的TNT® 偶联的兔网织红细胞裂解液系统简化了步骤,减少了获得体外翻译的结果所需的时间。

Q1:使用TNT®系统表达出的蛋白有哪些主要应用?

A1:蛋白:蛋白相互作用

GST pull-down实验 用来确认从其它实验得出的、某两个蛋白之间存在相互作用的结论。为了确定蛋白:蛋白相互作用的区域,需要在体外表达出一系列的缺失型蛋白或特定位点突变的蛋白,然后将这些蛋白与野生型的全长蛋白进行比对。

免疫共沉淀 利用TNT®系统表达出2个或更多的蛋白。该方法还需要其中某个受试蛋白的抗体,用于结合相互作用的蛋白所形成的复合体,然后进行免疫共沉淀,经过SDS-PAGE/Western Blotting进行分析。

蛋白:核酸相互作用
TNT®系统也可用于合成与DNA或RNA结合的蛋白(如转录因子),而避免了常规的、从细胞中分离目的蛋白的繁杂步骤。蛋白与核酸的结合可以通过凝胶电泳迁移实验(EMSA)来检测。与未跟核酸结合的同一蛋白相比较,蛋白:核酸复合物在电泳中迁移的速率变慢。

其它应用
克隆的ORF产物确认、突变蛋白的合成与特征研究、合成酶反应底物

Q2:TNT®系统表达出的蛋白产率如何?

A2:大多数TNT®系统表达的蛋白量都是有限的。以试剂盒提供的、作为阳性对照的质粒模板为例,50μl的反应体系中,能够产生150-300ng的蛋白。

Promega还提供了另外2个系统,用于表达较多量的蛋白:1)TNT® SP6 High-Yield Wheat Germ Protein Expression System (Cat.# L3260, L3261) ,在普通模式下,可产生100μg/ml的蛋白,在透析模式下,可产生200-400μg/ml的蛋白。 2)基于E. coli的S30 T7 High-Yield Protein Expression System (Cat.# L1110, L1115,可表达高达500μg/ml的蛋白。

Q3:TNT®系统表达出的蛋白需要纯化吗?

A3:不需要。对大多数下游应用而言,纯化都不是必须的。

本文摘自《Promega eNews》2009年11月刊。更多新产品、新技术、有奖竞猜、积分换礼等精彩内容尽在其中,欢迎点击查看。

我来说两句
0  条评论    0 人次参与
登录 注册发布
最新评论刷新
查看更多评论 > >

订阅生物通快讯

订阅快讯:

最新文章

限时促销

会展信息

关注订阅号/掌握最新资讯

今日动态 | 生物通商城 | 人才市场 | 核心刊物 | 特价专栏 | 仪器云展台 | 免费试用 | 今日视角 | 新技术专栏 | 技术讲座 | 技术期刊 | 会展中心 | 中国科学人 | 正牌代理商

版权所有 生物通

Copyright© eBiotrade.com, All Rights Reserved

联系信箱:

粤ICP备09063491号