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揭开低丰度蛋白的秘密[新品推荐]

【字体: 时间:2009年11月25日 来源:生物通

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  生物样品中高丰度蛋白的存在,掩盖了更具研究意义的低丰度蛋白。比如,血清或血浆中的白蛋白或免疫球蛋白让其它蛋白的检测变得极具挑战性。Bio-Rad公司的ProteoMiner protein enrichment kit能克服这种挑战,帮你揭开低丰度蛋白的秘密。

生物样品中高丰度蛋白的存在,掩盖了更具研究意义的低丰度蛋白。比如,血清或血浆中的白蛋白或免疫球蛋白让其它蛋白的检测变得极具挑战性。Bio-Rad公司的ProteoMiner protein enrichment kit能克服这种挑战,帮你揭开低丰度蛋白的秘密。ProteoMiner 低丰度蛋白富集系统是一种新型的样品制备手段,它能极为有效地减少复杂生物样品中蛋白浓度的动态范围。

ProteoMiner技术是如何富集低丰度蛋白的呢?下面这张图可以形象地说明。它是基于复杂样品与高度多样的六肽配基之间的相互作用。每个ProteoMiner珠子上都有不同的六肽配基,它们与某种蛋白具有特定的亲和性。当一个复杂的蛋白质样品与大量六肽配基共同孵育时,样品中的蛋白质会相应地找到其结合位点而被珠子捕获。由于珠子的结合能力有限,高丰度蛋白迅速饱和了相应配基(红色和黄色珠子),而多余的蛋白就被洗掉。与此相反,低丰度蛋白通过与特定配基(粉色和绿色珠子)的结合而富集。通过这种方式,低丰度蛋白质相对得到了富集与浓缩。

ProteoMiner系统采用了组合的六肽文库方法,而不是传统的免疫去除方法,这就最大限度地减少了对已知抗体的依赖,并防止某些与高丰度蛋白相结合的低丰度蛋白质的去除。某些低丰度蛋白无法通过传统方法检测,也能借此有效富集和浓缩。ProteoMiner系统适合处理多种类型的样品,比如血清、血浆、尿液、胆汁和血小板,与各种主流的下游蛋白分析技术兼容,包括1-D或2-D凝胶电泳,层析,SELDI及质谱。

根据起始样品蛋白量的不同,ProteoMiner 低丰度蛋白富集系统分别提供了小容量和大容量两种试剂盒。小容量试剂盒适合处理有限的样本材料,建议至少10 mg蛋白;大容量试剂盒则适合处理50 mg以上的蛋白。ProteoMiner系统采用离心柱形式,操作方便,且一次性的离心柱避免样品的残留污染。试剂盒中包含了富集低丰度蛋白过程中所需的所有必要试剂。小容量和大容量试剂盒分别可处理2个或10个样本。

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利用ProteoMiner protein enrichment kit富集低丰度血清蛋白。取等量的总蛋白进行2-D电泳,从图中可以看出,ProteoMiner珠子处理后凝胶的分辨率大大改善。高丰度蛋白大大减少,右图中可看见更多的蛋白点。100 µg蛋白样品在11 cm ReadyStrip pH 5–8 IPG胶条上等电聚焦,然后在Criterion 8–16% Tris-HCI预制胶中进行第二向的电泳。(生物通 余亮)

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