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在活细胞内实时观察细胞周期[新品推荐]

【字体: 时间:2009年11月25日 来源:生物通

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  2008年,日本科学家Miyawaki等开发出荧光泛素化细胞周期指示剂(缩写为FUCCI),这是一种基于荧光蛋白的探针,它将红色荧光蛋白(RFP)和绿色荧光蛋白(GFP)与不同的细胞周期因子Cdt1和geminin融合。Invitrogen将上述研究成果商业化,并结合了强大的BacMam基因导入系统,开发出使用更为方便的Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor。

2008年,日本科学家Miyawaki等开发出荧光泛素化细胞周期指示剂(缩写为FUCCI),这是一种基于荧光蛋白的探针,它将红色荧光蛋白(RFP)和绿色荧光蛋白(GFP)与不同的细胞周期因子Cdt1和geminin融合。这样,Cdt1和geminin就被泛素连接酶E3泛素化,继而降解。泛素连接酶的时间调节产生了Cdt1和geminin的双相周期。

在G1期,geminin降解,只能看到带有RFP的Cdt1,因此G1期的细胞显示出红色荧光核。在S、G2和M期,Cdt1降解,只剩下带GFP的geminin,因此细胞核呈绿色荧光。在G1/S过渡期,随着Cdt1水平下降和geminin水平升高,两种蛋白都存在,绿色和红色的叠加产生黄色荧光。红色-黄色-绿色,这种动态的颜色变化呈现出细胞周期和分裂的过程。


Invitrogen将上述研究成果商业化,并结合了强大的BacMam基因导入系统,开发出使用更为方便的Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor。这种预包装的试剂是即用的,避免了纯化质粒的麻烦,也省去了脂质体等转染试剂。

BacMam生物通以前介绍过,是一种改造过的杆状病毒,能将荧光蛋白导入胞内,不仅适合多种细胞类型,包括原代细胞和神经细胞,而且无明显的细胞毒性。另外优化起来也相当容易,只需增加或减少病毒就能控制表达水平。到目前为止,已有90多种细胞类型经过实验,可被BacMam技术有效转导,不过造血细胞和巨噬细胞除外。想要了解BacMam适用的细胞列表,请登陆http://www.invitrogen.com/site/us/en/home/Products-and-Services/Applications/Drug-Discovery/Target-and-Lead-Identification-and-Validation/Pathway-Biology/cellular-pathway-analysis/bacmam-system/bacmam-compatible-cells.html

整个流程也很简单:在细胞中加入试剂,放置1-2小时,再用BacMam增强剂(试剂盒中已提供)处理1-2小时。洗涤后过夜孵育,让荧光蛋白表达,然后就可以利用传统的荧光显微镜观察细胞周期了。

Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor可用于细胞周期进程的成像,并可评估药物、siRNA或其他因素对细胞周期的影响。Cdt1-RFP和geminin-GFP的荧光可耐受4%甲醛的固定及0.1% Triton X-100的通透处理,因此标记后的细胞可用抗体等来处理。如果你想了解此产品的更多信息,请点击索取。(生物通 薄荷)

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