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肝细胞生长因子最佳拮抗剂活性研究
【字体： 大 中 小 】 时间：2009年12月03日 来源：生物通
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NK4蛋白是近年来发现的肝细胞生长因子的最佳拮抗剂，在一篇文章中，研究人员将NK4基因插入载体pET-26b(+)，构建重组原核表达载体，转化大肠杆菌，进行了这种分子的活性研究。
生物通报道：NK4蛋白是近年来发现的肝细胞生长因子的最佳拮抗剂，在一篇文章中，研究人员将NK4基因插入载体pET-26b(+)，构建重组原核表达载体，转化大肠杆菌，进行了这种分子的活性研究。
NK4是肝细胞生长因子（hepatocytegrowthfactor，HGF）α链的含 447个氨基酸的片段，包括N末端的发夹结构和4个Kringle结构，编码序列长度1434bp，相对分子量50kDa。NK4保留了与受体cMet结合的结构域，可与HGF竞争结合cMet受体，但不能诱导cMet的酪氨酸磷酸化，从而阻断 HGF／Met系统的信号转导，抑制HGF的生物学效应，是目前已知的 HGF的最佳拮抗剂。体外实验证实NK4可抑制HGF诱导的肿瘤细胞的增殖、迁徙和侵袭。此外，NK4还能抑制血管新生。因此NK4在肿瘤治疗方面前景广阔。
研究人员为规模化生产NK4蛋白，将NK4基因插入载体pET-26b(+)，构建重组原核表达载体pET-26b(+)-NK4，并转化大肠杆菌Rosseta（DE3）。转化菌经IPTG诱导后以包涵体形式大量表达重组蛋白，占菌体总蛋白的42%。包涵体用盐酸胍溶解后经NiNTA树脂亲和层析纯化，蛋白纯度约为95%，经Western blot证实为NK4蛋白。纯化的重组蛋白行稀释复性后可抑制Hela细胞的贴壁、迁徙，并诱导其凋亡，证实制备的NK4蛋白具有生物活性。
外源性蛋白表达通常采用真核表达和原核表达两种方式，前者获得的蛋白活性较高，但效率低，不便于规模化生产；后者成本低且可大量表达，虽存在蛋白易发生折叠错误形成无活性的包涵体等问题，但可通过复性使目的蛋白恢复生物学功能。这项研究在现工作基础上构建NK4重组原核表达载体，并进行了相关条件的摸索，为后续NK4的深入研究提供了依据。
参与这项研究的包括温州医学院，重庆医科大学的裴仁治教授，涂植光教授，岑东博士等，文章发表在《中国生物工程杂志》上。
作者简介：
裴仁治教授
擅长： 周围神经病及肌肉病,肉毒素治疗血液病尤其是白血病淋巴瘤、再生障碍性贫血和血小板减少症的诊断和治疗以及小儿血液系统疾病的诊治,各种恶性肿瘤的化疗肝,胆,胰,胃肠疾病,腹部疾病内镜和腹腔镜 血液病尤其是白血病淋巴瘤、再生障碍性贫血和血小板减少症的诊断和治疗以及小儿血液系统疾病的诊治,各种恶性肿瘤的化疗。
医生简介： 裴仁治 ,男，主任医师 副院长、浙江省血液学会委员、省抗癌协会淋巴瘤专业委员、享受国务院特殊津贴、浙江大学医学院硕士生导师、兼职教授,擅长血液病尤其是白血病淋巴瘤、再生障碍性贫血和血小板 减少症的诊断和治疗以及小儿血液系统疾病的诊治，各种恶性肿瘤的化疗。从事血液科医疗、教学、科研工作20余年，在造血干细胞移植方面积累了丰富经验。曾获省科研进步奖4项，发表论文40余篇。享受国务院特殊津贴。
涂植光教授
硕士学位，博士生导师，1991-1999年任医学检验系副主任，1999年-2005年3月任医学检验系主任。1946年8月出生。临床检验诊断学重庆市首批学术技术带头人。重庆市一、二届政协委员。享受国务院政府特殊津贴，曾被评为“在工作中作出突出贡献的中国硕士学位获得者”。担任全国高等医学教育学会医学检验分会理事长、全国临床检验学会常委、全国临床检验管理委员会委员，全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会委员、重庆市第二届学位委员会委员、重庆市实验技术系列高评委等职务。1970年毕业于重庆医学院儿科系本科，1981年药理学专业研究生毕业并获硕士学位。曾赴英国Royal Postgraduate Medical School研修，从事高校教育工作20余年，一直承担包括博士生、硕士生、本科生教学。招收培养硕士生34名，博士生19名。在国内该学科研究生教育及课程体系建设上有较高造诣。曾获国家教学成果二等奖，重庆市及四川省人民政府教学成果一等奖、二等奖。先后主持国家教委优秀年轻教师基金、教育部重点科学技术项目等多项科研课题，发表科研论文54篇，其中10余篇英文论文被SCI等收录，另有20余篇为CA、EM等其他国际检索系统收录。曾获四川省科技进步三等奖。担任10本全国性专业学术杂志编委、常务编委或副主编。分别担任4本教育部及卫生部本科、8年制、7年制规划教材主编、副主编、编委，另参加七部专著、词典的编写。
