如何富集和检测分泌IL-17的活T细胞？[新品推荐]

【字体：大中小】 时间：2009年05月12日 来源：美天旎

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　　IL-17在细胞抵御细菌和真菌感染以及自身免疫病中扮演了重要的角色。为此，德国美天旎公司开发了IL-17分泌分析产品，用于富集和检测分泌IL-17的活T细胞。

白介素17（IL-17）是是IL-17家族（IL-17A-F）中的一员，是二硫键相连接的同型二聚体糖蛋白。人IL-17包含了155个氨基酸，分子量约为35 kDa。IL-17是由CD4+ T辅助性T细胞产生的。IL-17在细胞抵御细菌和真菌感染以及自身免疫病中扮演了重要的角色。为此，德国美天旎公司开发了IL-17分泌分析产品，用于富集和检测分泌IL-17的活T细胞。

IL-17分泌分析的原理

分析的起始材料为全血、外周血单核细胞（PBMC）或其他包含单层细胞的白细胞。T细胞以多克隆刺激物短暂刺激后，细胞被Catch Reagent—双特异性的抗体（CD45/IL-17）所标记。在37℃再培养细胞45分钟，使得IL-17分泌。分泌出来的IL-17则被细胞表面的双特异性的抗体所结合。然后，加入抗IL-17的荧光抗体，分泌IL -17的细胞就可以被流式细胞仪检测出来。再加入抗荧光抗体的微珠，即可进行分选。磁性标记的细胞保留在MACS柱中，而未标记的细胞则被洗脱。将柱子移出磁场，分泌IL-17的细胞则洗脱成为阳性选择的细胞组分。这些细胞现在可用于培养或分析。

范例

一、小鼠脾脏细胞用PMA/lonomycin刺激三个小时，分泌IL-17的T细胞被检测，加入抗PE的微珠，从而可用MACS技术富集。经过刺激的样本，分泌IL-17的CD4+T细胞富集后，表达频率从0.36%上升到60%以上，从106CD4+T细胞中回收了1444个细胞（=0.14%）。而未经过刺激的样本在富集前，分泌IL-17的CD4+T细胞仅有0.003%，富集后的表达频率有0.56%，从106CD4+T细胞中仅回收了6个分泌IL-17的细胞。

二、人PBMC在CD40抗体存在下经过抗原再刺激13小时。分泌的IL-17被检测，再标记抗PE的微珠从而被磁性富集。经过刺激的样本，0.035%的CD4+T细胞分泌IL-17。经富集后纯度可达到85%，从106CD4+T细胞中回收了248个分泌IL-17的细胞（=0.025%）。而未经过刺激的样本，富集前仅有0.005%的CD4+T细胞分泌IL-17。富集后纯度为1.89%，从106CD4+T细胞中仅回收了不到1个分泌IL-17的细胞。富集的IL-17+CD4+T细胞有97%共表达活化标志CD154，从而证实了该检测和富集方法的特异性。