冷泉港6月实验手册 聚焦ChIP-Seq和定向突变

近日，冷泉港实验设计手册（CSH Protocols）发布最新6月实验方案。其中有两个是免费的，一个是关于染色质免疫沉淀-测序（ChIP-Seq）的样品制备方案；另一个则聚焦果蝇的定点突变。

1. Native Chromatin Preparation and Illumina/Solexa Library Construction

作者：Keji Zhao等，美国国立心肺血液研究所

简介：高通量全基因组分析的应用越来越广，而新一代测序正在取代芯片成为基因组分析的首选技术，因为它占尽了灵敏度和规模的优势。本文描述了染色质免疫沉淀-测序（ChIP-Seq）的样品制备，如何利用天然染色体和Illumina新一代测序仪Genome Analyzer来分析组蛋白修饰模式。文中详述了每一步的实验操作，包括从淋巴细胞中纯化人CD4+ T细胞，利用微球菌核酸酶（MNase）消化来进行染色质片断化，接下来是染色质免疫沉淀和测序的文库制备。

链接地址：http://cshprotocols.cshlp.org/cgi/content/full/2009/6/pdb.prot5237

2. SIRT Combines Homologous Recombination, Site-Specific Integration, and Bacterial Recombineering for Targeted Mutagenesis in Drosophila

作者：Yikang Rong等，美国国立癌症研究所

简介：长期以来，突变分析一直是破译基因功能的宝贵工具。单基因座的系统重复靶定是很困难的，不能成为多细胞生物中的常规方法。作者开发出位点特异性整合酶介导的重复靶定方法（SIRT），来进行果蝇中的定点突变。SIRT靶定噬菌体phiC31整合酶的着陆位点，产生目的基因座的几种遗传变异体，而无需进行多个实验。SIRT需要构建一系列的质粒载体，它们的DNA元件排布不同。利用细菌重组方法，SIRT绕过了传统克隆技术的缺点，不依赖限制性酶切位点。

链接地址：http://cshprotocols.cshlp.org/cgi/content/full/2009/6/pdb.prot5236

（生物通 余亮）