4个步骤，玩转HaloTag多能融合标记蛋白[选购宝典]

Promega公司的HaloTag是一种多功能的融合蛋白标签，该标签能够提高蛋白可溶性和表达量，同时，此类融合蛋白还能够进行多种应用，包括蛋白表达与纯化、蛋白相互作用和荧光细胞成像。如果您对上述HaloTag技术的应用感兴趣，而又不知从何入手，那这一篇文章刚好适合您。

HaloTag是一种多功能的融合蛋白标签，该标签能够提高蛋白可溶性和表达量，同时，此类融合蛋白还能够进行多种应用：

• 蛋白表达与纯化
  
• 蛋白-蛋白、蛋白-DNA相互作用
  
• 荧光细胞成像（活细胞或固定细胞）
  

如果您对上述HaloTag技术的应用感兴趣，而又不知从何入手—这一篇文章刚好适合您：

4步法应用HaloTag技术：

1 设计

您需要考虑如下因素：
1. 我希望把HaloTag蛋白用于什么样的下游实验?
2. 我希望使用什么样的蛋白表达系统 (体外表达还是体内表达，原核系统还是真核系统？
3. 我希望把HaloTag标签融合到目的蛋白的N端还是C端？

选择合适的载体

2 克隆

选定了合适的载体后，你还需要克隆目的蛋白的编码序列。

• 设计引物时，加入了适当的限制性内切酶位点，以方便扩增ORF
  
• PCR扩增产物需经过纯化
  
• 在进行连接反应前，载体和PCR产物需经过酶切和纯化
  
• 将连接后的产物转化细菌，挑选阳性克隆，摇菌复制
  
• 纯化质粒
  

3 确认

通过测序来确认插入的基因序列是否正确

注意：如果你使用的是Promega公司的Flexi载体，请注意核酸序列从一个Flexi载体转移到另外一个Flexi载体的过程是高度保真的，因此，你只需要进行一次测序！

检测全长蛋白的表达、折叠与活性

注意：使用无细胞蛋白表达系统、HaloTag荧光标记以及SDS凝胶电泳，你仅需一个下午的时间就能完成HaloTag融合蛋白的确认工作！

4 检测

现在，你就可以将HaloTag系统用于蛋白相互作用研究、蛋白表达以及细胞成像了！

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