PCR酶新品巡礼之Clontech：跳过样品制备[选购宝典]

DNA聚合酶是每个实验室的常备品，PCR实验可少不了它。尽管PCR总体上仍遵循着经典的三步法，但PCR中的多个环节都有改进，包括PCR仪、PCR酶、缓冲液等等。这几年也涌现出不少新的PCR酶，要么适应更广泛的模板，要么扩增更长的片段，甚至索性跳过核酸纯化，直接从样本中扩增。生物通小编这就带您去瞧瞧……

PCR要想快，方法有很多种，比如买一台快速的PCR仪，再搭配个快速的PCR酶。不过，这快的代价可不小，一般的实验室可能难以承受。有没有一些更靠谱的方法呢，既加快实验进程，又节省经费？于是，研究人员决定从PCR上游的样品制备入手，试图跳过DNA提取和纯化，直接对样品进行PCR扩增。尽管样品中存在一些PCR抑制剂，但如今的PCR酶如此强大，理应能跨过这些障碍。

Clontech公司新近推出的Terra™ PCR Direct Polymerase Mix正是这样一种新颖的聚合酶。它能够让您跳过DNA提取和纯化，从血液、动物和植物组织等模板中直接扩增目的片段。这种高度灵敏的DNA聚合酶不仅能帮您节省宝贵的时间和经费，还让您节省宝贵的样品。如果样品本身非常少的话，那可经不起纯化的折腾，直接扩增兴许效果更好。

Terra PCR Direct中带有单克隆抗体，是一种热启动的PCR。它非常适合扩增短的DNA片段（2 kb以下），而不论模板纯度和GC含量。即使GC含量高于70%，它也能成功扩增。说了这么多，也许您还是对它的性能将信将疑，那么下面举几个例子，事实胜于雄辩。点击索取详细技术资料

血液

从EDTA或肝素处理过的小鼠血液中直接扩增靶点。取1μl EDTA或肝素处理过的血液，用Terra PCR Direct扩增cyclin D2基因（Ccnd2，0.5 kb）和转铁蛋白受体基因（TfrC，2 kb）。PCR反应体系为20μl（血液占5%），反应过程为经典的3步法，30个循环。取3μl产物进行电泳。如图1所示，Terra PCR Direct能够从血液样品中扩增出靶点。

植物

从西红柿和菠菜叶子中直接扩增靶点。取西红柿和菠菜叶子，用打孔机打成0.5 mm（第1道）和1.2 mm（第2道）的圆片。用Terra PCR Direct从中扩增细胞色素氧化酶基因（cox1，0.5 kb）。将圆片直接置于20μl反应体系中，并进行扩增；取5μl反应产物，跑电泳（图2）。Terra PCR也能够从大的和小的叶子样品中扩增出cox1。

组织

从小鼠尾巴和耳朵组织中直接扩增靶点。取1mm鼠尾活检样本和1.5mm2小鼠耳朵活检样本，用Terra PCR Direct直接扩增Ywhaz1（1kb）。将这些组织直接置于50μl反应体系中，并进行扩增。PCR结束之后，各取4μl与缺乏或包含蛋白酶K的上样缓冲液（分别为第1道和第2道）混合，然后跑电泳。如图3所示，用蛋白酶K处理过的PCR产物如期跑动（第2道），而未经过处理的PCR产物则滞留在点样孔里（第1道）。

看过上面这些例子，现在您终于相信Terra PCR Direct的强大了吧。要不然，您也来试试？如果效果确实不俗的话，想必那些生产核酸纯化试剂盒的厂家得郁闷好一阵子。（生物通 余亮）

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