创新参选：高通量菌液PCR 的改进

　　

2010实验室创新技术大奖评选活动开展半月以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目。不看不知道，原来大家在实验中还有这么多小技巧，小创意。从今天开始，生物通将刊登参选项目，与读者分享。如果您的实验也有类似的改进，别犹豫，赶快参选。无论是小改进，还是大创意，我们都欢迎。

据中科院武汉植物园的黄博士推荐，高通量菌液PCR可作如下改进。

项目：高通量菌液PCR 的改进

背景：一般阳性克隆的检测有三种方法：菌液或质粒PCR，质粒酶切鉴定和测序鉴定。但是最常用的是菌液PCR，方便快捷。然而常规菌液PCR操作中，是将一定体积的培养菌液，煮沸5min，然后离心取上清液作为PCR模板。在大量菌液PCR鉴定时，显得尤为耗时。

方法改进：菌液PCR 改进之处在于模板处理，具体操作：直接用无菌牙签放到培养菌液中，蘸有少许菌液即可，然后将此牙签直接转移到PCR 混合液中蘸一下，再直接运行PCR即可。 PCR程序中的第一步预变性，设置时间为5min，以破裂细胞，释放出DNA 作为PCR 的模板。此方法适合大量克隆的PCR检测，如48,96 孔平行进行。

结果：利用M13 引物，菌液PCR检测阳性克隆，pMD18-T 载体，插入片段 2.2 KB （Fig A） and 0.8Kb （Fig B）。Marker 为DL2000，大小分别为2000,1000, 750, 500, 250, 100bp。

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