创新参选:树脂道细胞超微结构固定方法的改进

【字体: 时间:2010年05月31日 来源:生物通

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据中山大学的姜博士推荐,在进行树脂道细胞超微结构固定的时候可作如下改进。

项目:树脂道细胞超微结构固定方法的改进

背景:生物样品在进行超微结构的研究时首先需要进行固定,固定的目的一方面为保持细胞在其自然状态下的结构及其组成成分,另一方面使高度动态的生物结构成为固定状态,从而具有高度的时空分辨率以适应电镜的要求。传统的化学固定方法具有明显的缺陷,由于化学固定剂作用时间相当慢 (几秒到几分钟),加之化学固定剂与生物样品的交联具有一定的选择性,因此不但不能使细胞内所有结构得以充分固定,而且还会引起细胞成分的转移和损失,从而使样品形成各种假象。

方法改进:我们在研究过程中发现建立在物理过程基础上的冷冻固定则具有明显的优势,其最大的特点是快速将细胞内所有结构和成分同时固定 (微秒到毫秒),从而获得最接近于自然状态的细胞超微结构。然而,在常压下冷冻固定通常仅能使样品表面10~30μm厚的细胞层得以充分固定,从而在较大程度上限制了冷冻固定技术的应用。

因此我们选择了高压冷冻技术,利用这一方法,我们克服了冷冻厚度的问题,这种方法可以在2100巴压力下对生物样品进行充分冷冻固定,并使冷冻样品的厚度增加至600μm。这种高压冷冻技术在植物样品中的应用,可以揭示出许多传统化学固定方法无法捕获的结构。

结果:高压冷冻固定技术比较于化学固定,在保存细胞的结构细节和组成成分方面具有无法替代的优势,利用高压冷冻技术,我们能揭示出许多传统化学固定方法无法捕获的结构,从而为植物细胞学家解释细胞结构与功能的关系提供了更为充分而准确的超微结构资料。

经验:在传统方法无法达到预期效果的时候,多开动脑筋,多看文献,寻找更新的方法,但是在这个过程中,要首先考虑实验室本身具有的资源,快速尝试,只有这样才能在短期内解决一些之前无法完成的难题。




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