创新参选：让TA连接成本降到最低

　　2010实验室创新技术大奖评选活动开展半月以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目。不看不知道，原来大家在实验中还有这么多小技巧，小创意。从今天开始，生物通将刊登参选项目，与读者分享。如果您的实验也有类似的改进，别犹豫，赶快参选。无论是小改进，还是大创意，我们都欢迎。

据兰州大学的刘兵兵博士介绍，TA克隆的成本可降至新低。

项目：让TA连接成本降到最低

背景：TA克隆方法（Original TA Cloning）把PCR片断与一个具有3‘-T突出的载体DNA连接起来的方法。它是一种极为常用分子实验手段，但目前常用的试剂盒基本在500RMB/20次，成本比较贵。因此实验室常用的方法是一次反应由标准的1ul载体用量减少到0.5ul。即便如此，对于做大量TA连接的实验室，耗费还是很大的。另外很多时候大家在PCR产物做TA连接时通常会先将产物进行纯化，认为这样做可以提高连接片段的特异性，其实这样做是事倍功半的行为。

方法改进：根据笔者的亲身经历，载体的用量可以降到0.1ul，反应体系减小到2ul。以Takara的pMD18-T vector（code D10 1A）为例，2ul反应体系各成分的用量为：solution I：1ul；pMD18-T vector：0.1ul；目的DNA的直接PCR产物（未纯化）：0.9ul。16℃5h左右或4℃过夜。另注：为了避免加0.1ul带来的误差，可以将10个或者20个的用量与solution I做成混合液。

结果：单从T vector的成本讲，有原来的25元（或12.5元）/次降到了现在的2.5元/次，再加上纯化试剂盒的费用及时间，都是一笔不小的数目，尤其是对于需要做大量连接反应的同学。

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