创新参选：一步法提取组织/培养细胞/细菌总蛋白

“赛默飞世尔特约之2010实验室创新技术大奖”评选活动开展以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目，这些项目中有的能减少实验步骤，有的能降低实验成本，还有一些改进了实验设备，让我们的实验过程更加轻松。为了感谢这些分享实验技巧的参选者，生物通将于2010年7月10日从在此之前投稿的参选者中抽出三名，送出世博会门票或等值的礼品。

　　

“赛默飞世尔特约之2010实验室创新技术大奖”评选活动开展以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目，这些项目中有的能减少实验步骤，有的能降低实验成本，还有一些改进了实验设备，让我们的实验过程更加轻松。

目前生物通已经公布了一些项目，这些项目也倍受读者的关注。为了感谢这些分享实验技巧的参选者，生物通将于2010年7月10日从在此之前投稿的参选者中抽出三名，送出世博会门票或等值的礼品。

北京大学临床肿瘤学院的陆哲明向我们介绍了一步法快速提取组织/培养细胞/细菌总蛋白的方法。

参选项目：一步法提取组织/培养细胞/细菌总蛋白

背景：在提取细胞或组织的总蛋白用于western blot检测时，往往采用非离子去垢剂裂解结合超声或匀浆等机械破碎的方法，将细胞膜打碎释放出细胞全蛋白。此法操作复杂，耗时费力，不仅易造成样本间交叉污染，而且需要较多的原始材料。加之，为了保证蛋白活性，过程中要保证冰浴环境，且需要加入昂贵的蛋白酶抑制剂。病理组织分析往往需要大样本量，当样品数量多时，此法就极为低效。特别是对于病理组织，材料往往稀少而珍贵，其低产量对比高成本更是让人烦恼。

方法改进：我们利用造价低、易获得的一次性注射器代替其它机械破碎仪器，将组织块切碎后（培养细胞/细菌免此步骤），直接加入1 X SDS-蛋白上样缓冲液，反复通过1ml注射器吹打，基因组DNA断裂，制备蛋白匀浆。此细胞裂解物经95度煮沸10分钟后可直接用于western blot，或者存储与-70度。由于注射器为一次性物品，有效防止交叉污染，整个蛋白提取过程可在2分钟内完成。

结果：

上图为用本方法提取大肠杆菌诱导与非诱导目的基因表达的总蛋白对比的SDS-PAGE结果。箭头所示处为目的蛋白。

上图为用本方法提取细胞总蛋白SDS-PAGE结果。

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