创新参选：如何提高DNA的酶切质量

“赛默飞世尔特约之2010实验室创新技术大奖”评选活动开展以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目，这些项目中有的能减少实验步骤，有的能降低实验成本，还有一些改进了实验设备，让我们的实验过程更加轻松。为了感谢这些分享实验技巧的参选者，生物通将于2010年9月10日从在此之前投稿的参选者中抽出三名，送出世博会门票一张。

　　

“赛默飞世尔特约之2010实验室创新技术大奖”评选活动开展以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目，这些项目中有的能减少实验步骤，有的能降低实验成本，还有一些改进了实验设备，让我们的实验过程更加轻松。

目前生物通已经公布了一些项目，这些项目也倍受读者的关注。为了感谢这些分享实验技巧的参选者，生物通将于2010年9月10日从在此之前投稿的参选者中抽出三名，送出世博会门票一张。

中山大学医学院的陈家杰总结了三种方法，能提高DNA的酶切质量。

背景：DNA的酶切主要应用于载体的构建和重组载体的鉴定，还有些线性DNA的制备等。我们时常会碰见因载体的双酶切效率低下而连接失败，还有双酶切切不开重组载体但测序正确影响实验进度，等。DNA的酶切效率的影响因素主要在于质粒载体本身，如市场上大多使用碱裂解法提取质粒DNA，这一方法容易导致质粒DNA上部分酶切位点（Nhe I, Hind III等）容易隐蔽，或者-20度保存质粒DNA容易形成高级结构，质粒DNA在某些宿主（E coli JM109，DH5a等）中部分位点的甲基化等。

方法改进：（1）加热处理，将要进行酶切的质粒DNA直接放于95度水浴10 sec后取出自然放冷，继续进行加样酶切；（2）可采用市场 上胶回收试剂处理质粒DNA（如OMEGA公司的胶回收试剂中Binding Buffer能使质粒的高级结构减少），回收质粒DNA，之后进行酶切；（3）对于一些高GC含量的酶切位如Not I等应当用甲基化缺陷的宿主菌如E coli Top 10等。

结果：提高DNA酶切效率和基因克隆的成功率，节省实验经费。

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