创新参选:分离病毒颗粒的方法

【字体: 时间:2010年08月05日 来源:生物通

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  “赛默飞世尔特约之2010实验室创新技术大奖”评选活动开展以来,生物通已经陆陆续续收到不少项目,这些项目中有的能减少实验步骤,有的能降低实验成本,还有一些改进了实验设备,让我们的实验过程更加轻松。为了感谢这些分享实验技巧的参选者,生物通将于2010年8月10日从在此之前投稿的参选者中抽出三名,送出世博会门票一张。

  

“赛默飞世尔特约之2010实验室创新技术大奖”评选活动开展以来,生物通已经陆陆续续收到不少项目,这些项目中有的能减少实验步骤,有的能降低实验成本,还有一些改进了实验设备,让我们的实验过程更加轻松。

目前生物通已经公布了一些项目,这些项目也倍受读者的关注。为了感谢这些分享实验技巧的参选者,生物通于2010年8月10日进行第二轮抽奖,从在此之前投稿的参选者中抽出三名,送出上海世博会门票一张。

中国科学院广州生物医药与健康研究院的林锦梅介绍了一种分离病毒颗粒的好方法。

参选项目:分离病毒颗粒的方法

背景:基因治疗现今取得了显著的进步,基因治疗中腺病毒载体的发展必需借助于两种技术,第一种是在来自所用病毒构建和扩增步骤的样品中定量测定病毒颗粒的高选择性高敏感性的快速方法,这一点对病毒原种生产方法的优化特别重要;第二种是纯化病毒颗粒的易于推广至工业规模的简单、可靠、可重复的方法。本研究涉及一种对病毒颗粒进行纯化的新方法。具体在于样品预处理,让病毒释放完全,减少水解蛋白酶的污染。提高病毒回收率和纯度。

方法改进:根据病毒来源选择不同萃取方法,机械或化学溶胞而制得体积小,容易操作;但是化学 溶胞又引入新的物料,增加后续分离纯化工作量。而等到细胞自溶自动释放病毒颗粒,在上清收集,一个是时间性,另外一个是体积大需估计柱载量的限度对纯化成本的影响。传统的机械溶胞是采用通过3~6个连续的解冻循环(-70℃乙醇干冰。37℃水溶)从核中释放病毒,如此获得的病毒释放不完全,而且重复性差。综上所述根据情况考虑对纯化路线进行改进。超声细胞破碎使用温和,减少步骤,在室温下能快速处理样品,机械溶胞需要摸索合适强度减少蛋白酶的释放。从数据分析,病毒峰超声1分钟比较适合。腺病毒是一个脆弱东西,超声时间过长对影响很大,另外也增加水解蛋白酶的释放。超声时间过短,核酸类物质不能完全打断,容易与目标蛋白结合成复合物改变电荷,使重复性差。

结果:超声溶胞从实际工作需要出发,快速,微量,费用低廉,技术要求不高,操作安全。实现费用与效益双赢。实现用一般常规实验能够完成的测定,不必使用贵重精密仪器。检验员经 训练能较好掌握某种测定方法,实验时间缩短。“简单易学”在一定程度上意味着能保证检验质量。

第一轮抽奖已公布,请点击查看实验小技巧火热征集中,更有机会赢取世博会门票,8月10日第二轮抽奖!

 

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