8月冷泉港实验方案聚焦锌指核酸酶技术

　　

盛夏8月，最新一期的冷泉港实验方案（Cold Spring Harbor Protocols）发布。本期的内容照例覆盖生物学的方方面面，如细胞生物学、分子生物学、免疫学等，其中有两篇是供大家免费浏览的。这两篇分别介绍了锌指核酸酶诱导的定向染色体删除，以及免疫沉淀中的细胞裂解。

第一篇：Analysis of Targeted Chromosomal Deletions Induced by Zinc Finger Nucleases

锌指核酸酶可谓最近的大热，因为它能够定向删除多种细胞类型及生物体的大片段DNA，让研究人员随心所欲地进行基因组编辑。Sigma-Aldrich公司也曾推出了CompoZr™ 锌指核酸酶技术，并利用此技术开发出定点基因敲除大鼠，屡获创新产品大奖。

锌指核酸酶（Zinc-finger nucleases, ZFNs）是人工改造的限制酶，通过融合锌指结构的DNA结合结构域和DNA切割结构域而成。在细胞中，ZFN能够在染色体上产生定向的DNA双链断裂，从而诱导目的基因的突变。

这一次，韩国首尔大学化学系的Jin-Soo Kim及其同事介绍了锌指核酸酶诱导的定向染色体删除，详细地描述了在细胞内检测染色体删除的方法，并利用PCR估计删除的频率。ZFN诱导的染色体删除示意图如下，锯齿形的线代表ZFN的靶位点。F和R是用于检测染色体删除事件的PCR引物。

第二篇：Lysis of Cultured Cells for Immunoprecipitation

这一篇介绍的是免疫沉淀中的细胞裂解。温和的去污剂常用于细胞裂解，但这其中也有不少学问。如果低的去污剂浓度足以裂解细胞（如1% NP-40或1% Triton X-100），那么此方法比机械匀浆方法要温和。去污剂的选择必须根据免疫沉淀抗体所识别的表位性质而调整。如果抗体识别的是线性的肽段表位（如合成肽段），那么可使用剧烈的变性裂解缓冲液（如RIPA缓冲液）。另一方面，如果抗体识别的是构象表位，则使用NP-40裂解液（或1% Triton X-100）。

这一篇protocol针对单层培养和悬浮细胞，介绍了不同的方法。文中还介绍了蛋白酶抑制剂选择的详细信息，以及如何制备通用的蛋白酶抑制剂混合物。（生物通 余亮）