创新参选:让高分子量DNA的回收更实惠简捷

【字体: 时间:2010年09月13日 来源:生物通

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  “赛默飞世尔特约之2010实验室创新技术大奖”评选活动开展以来,生物通已经陆陆续续收到不少项目,这些项目中有的能减少实验步骤,有的能降低实验成本,还有一些改进了实验设备,让我们的实验过程更加轻松。目前活动已截止,评选结果将于9月15日公布。

  

“赛默飞世尔特约之2010实验室创新技术大奖”评选活动开展以来,生物通已经陆陆续续收到不少项目,这些项目中有的能减少实验步骤,有的能降低实验成本,还有一些改进了实验设备,让我们的实验过程更加轻松。

目前生物通已经公布了一些项目,这些项目也倍受读者的关注。为了感谢这些分享实验技巧的参选者,生物通将于2010年9月10日从在此之前投稿的参选者中抽出三名,送出世博会门票一张。目前活动已截止,评选结果将于9月15日公布。

东华大学的陈格飞有一个新办法,能让高分子量DNA的回收更实惠简捷。

背景:真核基因组DNA为双链DNA,尽管属于非常惰性的化学物质,具有良好的化学耐久性,但在物理上仍是易碎。高分子量基因组DNA链长而弯曲,仅具有极微的侧向稳定性,因而容易受到最柔和剪切力的伤害。裂解消化、移液、振荡和搅拌等因素都能影响高分子量DNA的完整性,一般分子质量越大,获得的难度也相应增加。因此,基因组DNA的提取方法应尽量简捷、高效。

方法改进:采用2 mL离心管作为主要部件,如图所示,将其在图中虚线处拆分(剪去管帽和管底)并截取管帽内部的“内环”,用以固定透析膜(要求截流分子量低于所分离基因组 DNA分子量)。采用上述“内环”从离心管上下两端压入透析膜封闭管口,管内载有含基因组DNA的琼脂糖凝胶块,其浸于适量的0.5×TBE电泳缓冲液(44.5 mmol/L Tris,44.5 mmol/L 硼酸,1 mmol/L EDTA)。将整个装置放于水平电泳槽中,两端分别指向电场的两极,在电场作用下即可将凝胶中的基因组DNA泳出,并黏附于阳极端透析膜内侧。最后轻轻取出回收装置,轻轻开启一端,用镊子取出凝胶,移除多余上清液,留少量TBE并用移液器轻轻吹打以重悬黏附于透析膜上的基因组DNA。回收的基因组DNA移至一灭菌离心管中,加入1/10体积3 mol/L 乙酸钠和2.5倍体积无水乙醇, 轻柔颠倒混匀,于−20℃静置30 min,离心15 min(4℃,12 000 r/min),弃上清;再用预冷的70%乙醇洗涤DNA沉淀,离心15 min(4℃,10 000r/min),弃上清,重复洗涤一次;最后室温干燥5~10 min,适量TE缓冲液溶解,保存-20℃中备用。

 

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