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轻松克服转染挑战 Neon电转染系统[新品推荐]

Neon电转染系统

【字体: www.ebiotrade.com 时间:2011年05月19日 来源:生物通

摘要:

  新产品的推出往往代表了技术创新,让实验更简单易行,更高效可靠。Life Technologies公司推出了一种新一代的电穿孔仪——Neon™转染系统。它可将核酸(包括质粒DNA和siRNA)高效导入几乎任意一种动物细胞内,包括难以转染的原代细胞、干细胞和造血系统来源的细胞,同时保持高的细胞活性。

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将质粒或小分子RNA转染进入哺乳动物细胞是研究基因功能的重要手段。目前市场上也有多种转染试剂可供选择,从聚合物、脂质体到这两年新兴的纳米颗粒。就普通的细胞系而言,这些试剂大多都能实现高效的转染。然而,有些细胞“百毒不侵”,比如干细胞或原代细胞,你还真拿它没办法。无论怎么优化,转染试剂就是不灵。这时,换个思路,试试电穿孔吧。

电穿孔技术出现于20世纪80年代中期。电穿孔是一个物理过程,在这个过程中,细胞在高电压场强的作用下,细胞膜发生暂时的重新排列,使得细胞膜具有临时的大分子可通透性,可从周围环境中摄人包括核酸、蛋白质、碳水化合物一类的大分子以及一些小分子。与其他方法相比,电穿孔技术具有简便、重复性好、效率高、适用范围广等优点。由于这是个物理过程,较少依赖细胞类型,后继的生物或化学副作用小,基本上各种细胞都能work;导入DNA,RNA或者siRNA统统没问题,而且对大多数细胞类型,用电穿孔法核酸的转移效率比化学方法高得多。当然,这种方法也有缺点,那就是毒性较大,电脉冲会杀死一定比例的细胞,因此,每次实验都需要一定量的细胞。

新产品的推出往往代表了技术创新,让实验更简单易行,更高效可靠。Life Technologies公司推出了一种新一代的电穿孔仪——Neon™转染系统。它可将核酸(包括质粒DNA和siRNA)高效导入几乎任意一种动物细胞内,包括难以转染的原代细胞、干细胞和造血系统来源的细胞,同时保持高的细胞活性。

这个开放而灵活的转染系统包括:Neon™转染仪、Neon™移液器架、Neon™移液器以及两套Neon™转染试剂盒。

新颖的转染室

大家可能注意到,Neon系统中没有带传统的电转杯。确实,这就是它的独特之处。Neon系统用一个特殊的移液器吸头取代了传统的电转杯。移液器吸头内使用24K镀金电极,可形成更为均匀的电场,同时最大限度地减少温度升高和pH值变化幅度,在确保细胞高效转染的同时,也更为温和,保证细胞存活率更高。

装有镀金电极的Neon移液器吸头(右)与普通电转杯(左)的比较。研究表明,与普通电转杯相比,狭长形移液器吸头可产生更为均匀的电场,从而提高细胞存活率和转染效率。

高效转染

实践证明,Neon系统能够对多种难以转染的细胞进行高效转染,包括原代星形胶质细胞、原代树突状细胞、Jurkat、小鼠胚胎干细胞等(表1)。多种细胞类型可获得超过75%的转染效率。截至目前,使用Neon转染系统发表的文献已超过百篇,覆盖了人、小鼠、大鼠等多种细胞。觉得摸索电转条件无从下手?别担心,在转染前,你只需登录Neon的网页(www.invitrogen.com/neon),就能找到细胞特异的实验条件,无需反复优化,轻轻松松提高转染效率和细胞活性。另外Life Tech还有一个专门供Neon客户分享他们的实验结果及经验的网站Neon Protocol Exchange(http://www.protocolexchange.com/index.jspa),在这里有很多成功案例,供你参考。你也可以与大家分享你的成功案例。

表1. 部分经Neon™ 转染系统成功转染的细胞系。

细胞系

细胞来源

转染效率* (%)

活细胞 (%)

原代星形胶质细胞

大鼠脑神经元

76

88

CHO

中国仓鼠卵巢

91

92

原代树突状细胞

人血

50

70

人神经干细胞

ES

53

97

Jurkat

T细胞白血病细胞

94

97

KG-1a

人血

76

83

原代MEF细胞

小鼠胚胎

80

75

小鼠胚胎干细胞

小鼠胚胎

88

96

* 转染效率是根据活细胞和死细胞的全部群体来计算的。

设计灵活

有时,细胞很珍贵,若每次转染所需的细胞量较少,那么你就能开展更多更复杂的实验。Neon系统带有两种吸头:10 μl和100 μl,让您可根据实验要求灵活选择,而不像传统电穿孔仪那样只能转染固定量的细胞。使用Neon系统,每次最少可转染2×104个细胞,最多可转染2×107个细胞。当然,这并非绝对。若你的细胞更少或更多,也可一试,据Life Tech的专家介绍,有一位客户曾成功转染了5000个原代毛囊细胞。

使用简单

由于省掉了电转杯,转染过程也更为简化:只需将细胞和核酸吸入Neon移液器吸头中,再插入到移液器吸头架上,并按“Start”即可。转染过后,直接将细胞加入培养容器中。既没有繁琐的移液,也不需要清洗电转杯。而且,通用的试剂盒适用于所有细胞类型,不用购买多个试剂盒,也无需鉴定最佳缓冲液。当然,一次性使用的24K金电极吸头成本不低。因多次使用会导致金包被变薄,改变吸头的电导率,所以每个吸头最多只能使用两次。


 
若您的实验室经常与难转染的细胞打交道,那真的不妨一试。害怕效果不好?那可以先申请DEMO演示啊。

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