基因组纯化之Promega篇 多样化的选择[选购宝典]

【字体: 时间:2011年05月26日 来源:生物通

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  生物通小编这次就带大家巡一巡众多品牌的基因组DNA纯化产品,并教大家如何挑选适合自己的纯化产品。 第一站是Promega。关于基因组DNA的纯化,Promega提供了丰富的产品。若是一一介绍,恐怕大家看了更晕。那么,生物通先给大家介绍两款经典产品,然后再从不同样品类型入手,并结合样品起始量和通量,分别介绍最新产品。

第一站我们要介绍的是Promega公司。在生物技术这个年轻的领域中,Promega公司进驻中国已有26年的历史,可不是一般的长。而且,相对于其他进口品牌,该公司产品价格亲民。在物价飞涨的今天,这一点更是难能可贵。

回到正题,关于基因组DNA的纯化,Promega提供了丰富的产品。若是一一介绍,恐怕大家看了更晕。那么,生物通先给大家介绍两款经典产品,然后再从不同样品类型入手,并结合样品起始量和通量,分别介绍最新产品。

经典产品之一:Wizard® 基因组DNA纯化试剂盒

此试剂盒是基于经典的沉淀法,可从全血、组织培养细胞、动物及植物组织、酵母、革兰氏阳性及革兰氏阴性细菌中提取基因组DNA,纯化方法简单、快速。

操作过程也是经典的4步。首先是裂解细胞和细胞核。对于全血的DNA提取,这一步则包括裂解红细胞,接着裂解白细胞和细胞核。如果需要,在这一步可加入RNase消化。接着通过盐沉淀步骤去除胞内蛋白。之后,通过异丙醇沉淀浓缩基因组DNA,并通过乙醇洗涤。纯化得到的DNA可用于扩增反应、限制性酶切消化和膜杂交等多种应用。

这一试剂盒能够胜任多种材料,对样品的起始量要求也很广。以全血为例,低至50 μl,高至10 ml都OK。因此,的确是实验室的不错选择。价格方面,500次(每次300 μl全血)试剂盒的价格为2,742元,单次不到5.5元。

采用Wizard® 基因组DNA纯化试剂盒从不同起始材料中纯化DNA的产量如下:

来源

起始样品量

DNA产量

全血

300 μl

5-15 μg

1 ml

25-50 μg

10 ml

250-500 μg

96孔板,50 μl/

0.2-0.7 μg

组织培养细胞

106-107细胞

5-30 μg

鼠肝

11 mg

15-20 μg

鼠尾

0.5-1 cm

10-30 μg

昆虫细胞

5×106细胞

16 μg

植物叶组织

40 mg

7-12 μg

细菌培养液

108-1010细胞

5-20 μg

酵母

1.9×108细胞

4.5-6.5 μg

经典产品之二:Wizard® Magnetic 96 食品DNA 纯化系统

此系统可从多种天然和加工食物中纯化出DNA,包括谷物种子、谷物粉、大豆、大豆粉和豆奶、薯片、巧克力及含巧克力的食品、蛋黄和植物油等。从这些样品中纯化出的DNA 可用于转基因作物(GMO)的序列测定。

纯化过程使用了MagneSil® 顺磁性颗粒,仅需极少的离心,也不需有机溶剂抽提,快速简便,仅用常规方法1/3 的时间即可完成。此试剂盒的价格为13,203元/400次。

除了这两个经典产品,Promega近几年也推出了不少新产品,可满足你的“三高”要求——纯度高、产量高、通量高。生物通将按照样品类型一一介绍。

组织

我们都知道,若DNA样品有酒精残留,可能会抑制下游的酶解反应。为解决这一问题,Promega推出了ReliaPrep™ 组织基因组DNA小提系统。它提供了完整即用的方法,可从高达25mg组织、1个口腔拭子、或1cm的剪断鼠尾中纯化得到高纯度的gDNA。整个操作过程仅需30分钟或更短,无需酒精洗涤或沉淀即可得到完整的gDNA,适合基因分型、芯片和测序等苛刻应用。

这个试剂盒采用的是柱提法,也是简单的4步。首先破碎起始材料,释放DNA;然后让DNA与ReliaPrep™结合柱结合;利用洗涤液去除杂质;最后是洗脱。不过此洗涤液不同于以往的70%乙醇,也就避免了乙醇残留所带来的问题。此外,系统中的试剂都以即用型提供,无需添加或配制。

血液

Promega提供了ReliaPrep™、Wizard®以及Maxwell® 三个系列的gDNA纯化试剂盒,能够从哪怕最具挑战性的血液样品中提取基因组DNA。前面提到的经典产品Wizard® 基因组DNA纯化试剂盒就能从50 μl–10 ml全血中提取gDNA。

若血液量较少,你还可以试试ReliaPrep™血液基因组DNA小提系统。它的特点同上,无需酒精洗涤,即可从多达200μl血液或体液中始终如一地提取到纯净的完整基因组DNA。基因组DNA可以从新鲜的或冷冻的血液中制备,在不到40分钟内可得到4–10μg的预期DNA产量,当然这取决于血液样品中的白细胞数目。

若血液量较多,ReliaPrep™大容量高通量gDNA提取系统则更为合适。它能以规格可调的模式从3-10ml血样中提取基因组DNA。该方法无需繁琐的离心步骤,也无需使用有毒试剂,而这些是沉淀提取法所固有的。ReliaPrep™大容量高通量gDNA提取系统已在Hamilton Robotics MICROLAB® STARplus液体处理工作站中实现自动化,可以一次性处理96个样品。对于一次最多32个样品的低通量gDNA提取,可以使用ReliaPrep™ 32 LV HSM的手动模式,由用户手动进行移液。

上面介绍的这些产品大部分采用手动操作来提取gDNA。随着人们对速度、质量的要求不断提高,有些实验室也开始尝试使用自动化的纯化系统。Maxwell® 16仪器便是Promega公司近年来推出的一款纯化仪。

Maxwell® 16仪器可自动纯化高质量DNA、RNA、病毒总核酸和重组蛋白,均衡性好,省时省力,可满足多种下游应用。纯化的介质为顺磁性颗粒,能够实现对目标分子的最佳捕获、洗涤以及洗脱。与传统的硅胶膜方法相比,磁珠带来了更高的结合量和更干净的洗脱。将样品或样品裂解物直接加入预先装有试剂的试剂筒内,即可按“开始”键,启动纯化程序。试剂盒与自动纯化程序均经过优化,能够从特定样品中纯化出最高质量的目标用于下游实验。

Maxwell®16自动纯化仪有两种配置可供选购:用于得到最大产量的SEV (Standard Elution Volume,标准洗脱体积,200-400μl),和用于得到最高浓度的LEV(Low Elution Volume,低洗脱体积,30-100μl)。此外,SEV和LEV仪器均可配置Flexi Method 固件,用户可以自行构建Maxwell® 16自动纯化仪的程序,做进一步的性能优化。

Maxwell® 16自动纯化仪预置有纯化程序,试剂盒内有预先装有各步骤试剂的条形试剂筒,这些程序与试剂盒最大限度地增加了操作的简便程度。在18-50分钟内(取决于样品的类型),该自动纯化仪可处理1-16个样品。有了Maxwell® 16,你就可以有更多时间去完成其他更具创造性的工作。

目前,Promega提供了以下试剂盒,可用于Maxwell® 16自动纯化仪。

名称

用途

Maxwell® 16 LEV Blood DNA Kit

从血液中自动化提取DNA(低洗脱体积)

Maxwell® 16 Blood DNA Purification Kit

从血液中自动化提取DNA

Maxwell® 16 Cell DNA Purification Kit

从细胞中自动化提取DNA

Maxwell® 16 Tissue DNA Purification Kit

从组织中自动化提取DNA

Maxwell® 16 Mouse Tail DNA Purification Kit

从鼠尾中自动化提取DNA

Maxwell® 16 FFPE Tissue LEV DNA Purification Kit

FFPE样品中自动化提取DNA(低洗脱体积)

Maxwell® 16 Cell LEV DNA Purification Kit

从细胞中自动化提取DNA(低洗脱体积)

Maxwell® 16 Viral Total Nucleic Acid Purification Kit

从血清、血浆或其他样品中自动化提取病毒总核酸

Maxwell® 16 Buccal Swab LEV DNA Purification Kit

从口腔拭子中自动化提取DNA

Maxwell® 16 FFPE Plus LEV DNA Purification Kit

FFPE样品中自动化提取DNA(低洗脱体积)

ReliaPrep™ Large Volume HT gDNA Isolation System

3-10ml血样中提取基因组DNA

若您对于选择什么样的纯化产品还是心里没底,那么可以登陆Promega英文网站。它上面有个小工具—核酸纯化产品选择器,通过几个简单的问答(如样品量和通量),就可以推荐适合的产品,相当方便。当然,你也可以点击此处索取gDNA纯化的相关资料。(生物通 余亮)

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