Clontech带你快速捕获表达目的蛋白的细胞[新品推荐]

【字体: 时间:2011年09月09日 来源:生物通

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  生物通报道 Clontech公司(Takara旗下全资子公司)不久前推出了CherryPicker 细胞捕获及分析试剂盒。该系统不仅可以监控表达目的蛋白或带有活性启动子的细胞,还可利用抗体包被的磁珠来捕获这些细胞。

生物通报道 Clontech公司(Takara旗下全资子公司)不久前推出了CherryPicker 细胞捕获及分析试剂盒。该系统不仅可以监控表达目的蛋白或带有活性启动子的细胞,还可利用抗体包被的磁珠来捕获这些细胞。

在基因表达分析中,通常将目的基因与荧光蛋白(如GFP)基因共同表达,通过荧光来判断哪些细胞表达了目的蛋白。然而,即使你知道哪些是阳性细胞,也很难将其富集。流式细胞仪分选固然可以实现,但大部分实验室都不方便使用这台高度精密的仪器。现在,有了CherryPicker,2小时内即可实现目的细胞的捕获。

CherryPicker系统有两个版本,一个适合监控启动子活性,另一个则适合基因表达分析。在这两个版本中,又分为普通版和慢病毒版(Lenti-X),后者适合难转染的细胞。

捕获带有活性启动子的细胞

通过无启动子的CherryPicker系统,CherryPicker细胞捕获系统和Lenti-X CherryPicker细胞捕获系统,可监控目的启动子的激活,并捕获那些包含活性启动子的细胞。将一个有功能的启动子插入无启动子的pCherryPicker1报告载体中,生成一个红色荧光蛋白(CherryPicker)。此荧光蛋白展示在哺乳动物细胞的表面,随后被CherryPicker特异的抗体轻松捕获。

捕获表达目的蛋白的细胞

通过双顺反子的CherryPicker系统,CherryPicker细胞捕获系统(IRES)和Lenti-X CherryPicker细胞捕获系统(IRES),可鉴定、监控并捕获表达目的蛋白的哺乳动物细胞。IRES技术让目的蛋白与膜定位的红色荧光蛋白(CherryPicker)在同一个转录本中同时表达。表达目的蛋白的细胞必须同时表达CherryPicker,并且能通过CherryPicker特异的抗体被磁珠捕获。

至于富集的效果如何,请看下图。从混合细胞中高效地富集CherryPicker细胞。构建两种细胞群体,一种表达AcGFP1,另一种表达CherryPicker。将两种细胞以AcGFP1:CherryPicker >6:1的比例混合。使用CherryPicker Assay Kit从混合细胞中富集表达CherryPicker的细胞。富集后的AcGFP1:CherryPicker比例 >1:4。使用流式细胞仪确认富集前后细胞的分布情况。

CherryPicker细胞捕获系统包含了载体、捕获抗体和磁珠,规格为60次,价格为8565元。Lenti-X的版本则要贵一点,价格为9108元。不过,要记得自备磁力架,或者向Clontech购买。(生物通 余亮)

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