EZ Reader系列药物筛选平台[新品推荐]

【字体: 时间:2012年12月19日 来源:基因有限公司

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  EZ Reader系列药物筛选平台的核心是基于微流体芯片技术的迁移率检测技术(Mobility-Shift Assay),该技术将毛细管电泳的基本理念应用到微流体环境中,在不加入中止试剂的情况下检测酶学实验。

系列药物筛选平台的核心是基于微流体芯片技术的迁移率检测技术(Mobility-Shift Assay),该技术将毛细管电泳的基本理念应用到微流体环境中,在不加入中止试剂的情况下检测酶学实验(图一)。用于实验的底物是带有荧光标记的多肽,在反应体系中酶的作用下,底物转变为产物,其所带的电荷也发生了相应的变化,Mobility-Shift Assay正是利用底物和产物所带电荷的不同,将二者进行分离,并分别进行检测。

在微流体芯片中对样品进行分离的力量来源于两个不同的方面,电动力学和液体压力。工作时,96或384孔板中的反应体系在负压的作用下通过芯片底部的吸样针被吸入芯片内部的管路中。由于芯片中分离管路上被施加了电压,带有荧光标记的多肽底物和反应产物由于电荷的不同被分离,然后在检测窗口进行信号的激发和检测。在检测每一个样品时,都可以同时看到底物和产物的信号。图二显示了Mobility-Shift Assay技术的典型信号数据。产物的量通过计算Conversion值,即产物峰的高度比上底物峰和产物峰高度之和(Product peak height/(Substrate+Product peak height)),来进行评估。在进行实时动力学检测时,仪器会根据设定的时间间隔将样品吸入芯片中进行分析。


 
图一,Mobility-Shift Assay技术原理

图二,Mobility-Shift Assay技术的典型信号数据

EZ Reader系列药物筛选平台的应用覆盖了药物筛选过程的多个方面,包括筛选实验开发、化合物筛选、效用机理研究(MOA,Mechanism of Action)及构效关系研究(SARs,Structure-Activity Relationships)。大多数作为药物筛选靶标的酶,如激酶、蛋白酶、磷酸酶、组蛋白脱乙酰酶(HDAC)、磷酸二酯酶(PDE)及酰基转移酶等,都能够在EZ Reader平台上进行筛选。

为了进行高通量快速激酶筛选,Caliper公司为EZReader平台订制了ProfilerPro Kinase Profiling Kit。该试剂盒以216种激酶为靶标,在ATP Km下进行激酶的profiling。酶、荧光多肽底物以及相应的对照被预先加入384孔板中,使科学家最多可以在一块板上针对24种激酶,筛选12种化合物。通过EZ Reader检测并分析后,可以直接看到每个化合物对某种激酶的抑制情况(图三)。目前所有的216种激酶都与癌症及其它疾病相关,其中试剂盒1、2中的激酶覆盖整个人类激酶组的各个分支,其它试剂盒则集中研究特定类型的激酶。ProfilerProKinase Profiling Kit使科学家可以在自己的实验室中简单快速的筛选以激酶为靶标的候选药物或研究先导化合物对靶点的特异性,从而大大加快了药物研发的进程。


 
图三,ProfilerPro Kinase Profiling Kit结果及与文献数据的比较

除了可以利用Caliper提供的ProfilerPro试剂盒进行激酶筛选以外,科学家也可以针对自己关心的药筛靶标在EZReader平台上开发相应的筛选实验和MOA实验。

综上所述,EZ Reader系列药物筛选平台及基于微流体芯片的Mobility-Shift Assay技术与药物筛选领域的其它技术相比,具有很多的优势,具体体现在:

(1)直接检测酶促反应的底物和产物,灵敏度高,假阳性和假阴性率低
(2)可以覆盖几乎所有的药物筛选酶靶标
(3)具有实时动力学检测功能,提高了筛选实验开发和MOA研究的效率,节省了试剂
(4)不需要抗体或放射性试剂
(5)很高的检测精度,可以检测到其它技术没法检测的弱抑制剂
(6)简单快速的开发筛选实验
(7)适用于激酶实验中很宽的ATP浓度范围
(8)很小的反应体积(小体积微孔板,4-12 μl体系)

由于EZ Reader平台的这些优势,目前全球主要制药公司中,80%以上已经使用该系统作为其药物筛选的核心平台。未来,EZ Reader平台和基于微流体芯片的Mobility-Shift Assay技术必将在药物筛选领域发挥更大的作用。

了解EZ Reader平台的更多信息

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