2012聚焦转染：第二站Roche[选购宝典]

编者按 2005年，生物通曾重磅推出“聚焦转染”专题，详细介绍了各大公司的转染试剂，并总结了转染过程中的一些注意事项，备受好评。如今，七年过去了。转染市场风云变幻，多个新产品涌现而出，一些旧产品更弦易主。我们觉得，是时候推出更新版的转染专题啦。于是便有了这个“2012聚焦转染”专题。

一提起罗氏的转染试剂，大家肯定立马想到Fugene 6/HD。直到有一天，罗氏不再出售Fugene了，我们才知道原来它并非罗氏制造的。Fugene是Fugent公司的注册商标，现在该产品由Promega公司分销。

即使Fugene 6/HD不在手，罗氏也毫不畏惧，因为它集合二十年的转染经验，推出了X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP转染试剂。X-tremeGENE 9试剂为多种常用的细胞系带来了高效的性能，而X-tremeGENE HP试剂则更适合于难转染的细胞，比如原代细胞、昆虫细胞。这两款试剂还有一点与Fugene很相似，那就是对细胞温和。

X-tremeGENE 9 & X-tremeGENE HP

这两款试剂都综合了低的细胞毒性和高的转染效率，让更多细胞存活，且带来生理上更相关的结果。而且，转染步骤也相当简单：只需用无血清培养基稀释转染试剂，与质粒共同孵育，然后逐滴加入细胞中。研究人员所需的优化极少，当然，在转染之前，你还是得优化转染试剂与DNA的比例。建议的比例是3:1，但对于特定研究，2:1至7:1的比例可能会提高转染效率。

此外，X-tremeGENE HP试剂还经过0.2 μm孔径的膜过滤，无动物来源成分，在血清中也有活性。它与核酸形成复合物，促进高效的DNA转移，而带来的生理和形态学改变极少。它非常适合细胞分析和蛋白表达研究。

如何选择这两款试剂，请看下表。如果转染HeLa、HEK-293等普通细胞系，这两个都能胜任。至于那些难搞定的细胞，则最好选择X-tremeGENE HP试剂。若说到试剂的温和性，恐怕X-tremeGENE 9试剂要更胜一筹。

	X-tremeGENE HP试剂	X-tremeGENE 9试剂
DNA的转染	+++	+++
标准细胞系的转染	+++	+++
难转染细胞系的转染	+++	+
原代细胞的转染	++(+)	不建议
试剂的温和性	++(+)	+++
使用简单	++	+++
转染后的毒性	非常低	非常低到极低

X-tremeGENE 9试剂的价格为1764元/0.4 ml、3545元/1 ml，X-tremeGENE HP试剂的价格为2098元/0.4 ml、4851元/1 ml。（价格仅供参考）

使用X-tremeGENE 9/HD的tips

1. X-tremeGENE 9 DNA转染试剂应储存在+2至+8°C，X-tremeGENE HP DNA转染试剂应储存在-15至-25°C。
2. 使用前，将装有X-tremeGENE DNA转染试剂的玻璃瓶放置于+15至+25°C，并漩涡一秒。
3. 请勿分装X-tremeGENE DNA转染试剂；将剩余的转染试剂保存在原装的玻璃瓶内。
4. 尽量避免未稀释的X-tremeGENE DNA转染试剂与塑料表面的接触。
5. 使用时，X-tremeGENE DNA转染试剂与DNA复合物的最小体积为100μl。减少复合物体积将会显著降低转染效率。
6. 请避免使用聚苯乙烯类管子或微孔板进行X-tremeGENE DNA转染试剂与DNA复合物的制备。若不能避免聚苯乙烯材料，应确使转染试剂直接加入无血清培养基或Opti-MEM I低血清培养基中。
7. 请勿使用(聚)硅酮处理的吸头或管子。
8. 确保细胞在转染时期仍处于指数增长阶段。
9. 转染时，应设计合适的对照，包括：(1)未转染的细胞；(2)仅加入转染试剂的细胞；(3)仅加入DNA的细胞。
10. 转染试剂与DNA的最优比例，以及复合物的最适总体积，应根据细胞系、细胞密度、检测时细胞生长状况和基因表达的不同进行调整。

X-tremeGENE siRNA 转染试剂

X-tremeGENE siRNA 转染试剂是一个基于脂质体的、并经过优化的转染试剂。虽说名字上写着siRNA，但它也能用于siRNA和表达质粒的共转染。它能和小干扰 RNA（siRNA）或siRNA/质粒DNA混合物形成复合物，并高效地转入动物细胞，引发相应的基因沉默。相对较小的细胞内毒性，确保观测到的细胞效应仅同转染或共转染的siRNA相关。有无血清均可进行转染，转染后无需进行换液操作。

操作流程：用无血清Opti-MEM分别稀释X-tremeGENE siRNA 转染试剂和siRNA，混合并在室温下孵育15-20分钟。加入细胞，监控干扰效果。

价格：2816元/1 ml，11981元/5×1 ml（24孔板的每孔建议用量为2.5 μl）（价格仅供参考）

使用X-tremeGENE siRNA的tips

1. 对于初次优化，使用下列量的X-tremeGENE siRNA转染试剂（µl）和siRNA（µg）：10:2、2.5:0.5、1:0.2。
2. 根据罗氏的经验，24孔板的每孔使用2.5 μl X-tremeGENE siRNA转染试剂，可实现大部分细胞类型的高效knockdown。
3. 如果可能，初次实验时排除抗菌剂。一旦建立了高效的条件，在监控转染结果时可加回这些组分。X-tremeGENE Reagent:siRNA复合物必须在不含血清的培养基中制备，即使细胞在血清存在时转染。

欢迎索取X-tremeGENE系列转染试剂的更多资料！

细胞特异的转染步骤

罗氏提供了一些细胞特异的转染步骤（Cell-type specific protocols），作为您使用转染试剂的指引。当然，这些仅供参考。罗氏还有一个转染数据库，提供了相关引用文献的链接以及一些客户反馈。您可以根据细胞名称搜索相关的转染步骤，使用下拉菜单，比较方便。网站上例如：在搜索用X-tremeGENE 9转染试剂转染293细胞时，网页上出现如下结果。

293细胞已被7位客户成功转染，利用X-tremeGENE 9转染试剂和质粒DNA。
转染类型：瞬时
以下比例获得了最佳结果（试剂µl:DNA µg）：3:1；2:1
注意：这些来自客户反馈的比例仅作为指引，未经过罗氏验证。最佳的转染条件可能有所差异，须根据经验确定。

（生物通 余亮）