打破旧的电泳误区[心得点评]

【字体: 时间:2012年03月28日 来源:生物通

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  一提起蛋白预制胶,大家总是摇头晃脑兼摆手。有人说效果一般,而更多人是嫌价格太高。其实,我想大多数人还是不太了解预制胶,以为和我们自己在实验室中配制的凝胶是一样的。其实,就Life Technologies的NuPAGE凝胶而言,这两者有着天壤之别。NuPAGE,NuPAGE,理所当然是New PAGE啦。

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一提起蛋白预制胶,大家总是摇头晃脑兼摆手。有人说效果一般,而更多人是嫌价格太高。其实,我想大多数人还是不太了解预制胶,以为和我们自己在实验室中配制的凝胶是一样的。其实,就Life Technologies的NuPAGE凝胶而言,这两者有着天壤之别。NuPAGE,NuPAGE,理所当然是New PAGE啦。

现在,是时候打破旧的电泳误区啦。

蛋白分离误区:
1. 凝胶试剂总是修饰我的蛋白
2. NuPAGE® 凝胶跑得太慢了
3. 预制胶太贵

误区:凝胶试剂总是修饰我的蛋白

事实:NuPAGE® 凝胶试剂实际上保护了您的蛋白

更中性pH是关键

tris-甘氨酸凝胶系统的根本缺点是样品制备过程中的蛋白降解。在使用pH 6.8的tris-甘氨酸样品缓冲液时,样品在缓冲液中加热,因tris-甘氨酸的负温度系数导致pH值下降。这最终导致蛋白水解。

NuPAGE® 凝胶试剂通过维持较高的样品缓冲液pH值,保留了蛋白样品的完整性(图1)。NuPAGE® 样品缓冲液的pH值不会低于pH 8(即使是加热到70°C),因此样品制备过程中蛋白样品不会降解。

图1. 看看NuPAGE® 凝胶的与众不同之处。(A) NuPAGE® 凝胶利用1×MES缓冲液运行。(B) tris-甘氨酸凝胶利用tris-甘氨酸/SDS缓冲液运行。图片显示,与tris-甘氨酸凝胶相比,NuPAGE® 凝胶产生锐利、完整的条带,代表了未水解的蛋白,特别是在第3、5、7、8和9道。

样品上样:(1) Mark12™ 未染色标准品,10 μL;(2) 大鼠肝裂解液,10 μg;(3) 溶菌酶,6 μg;(4) Bio-Rad® 宽范围标准品,1:50稀释;(5) BSA,6 μg;(6) MagicMark™ XP标准品;10 μL;(7)人IgG,6 μg;(8)人IgM,6 μg;(9)大肠杆菌裂解液,10 μg;(10) Novex® Sharp未染色标准品,10 μL。

误区:NuPAGE® 凝胶跑得太慢了

事实:NuPAGE® 凝胶可在250V下跑24分钟

标准运行步骤

为了获得有效的分离,传统Laemmli凝胶需要跑90分钟。相比之下,NuPAGE® 凝胶的标准步骤则为200V,35分钟。此外,如果使用加速步骤,仅需24分钟就能获得有效分离(250V)。

图2. 加快运行时间,而不牺牲性能。NuPAGE® 样品上样:(1) Mark12™ 未染色标准品,10 μL;(2) 大鼠肝裂解液,10 μg;(3) 溶菌酶,6 μg;(4) Bio-Rad® 宽范围标准品,1:50稀释;(5) BSA,6 μg;(6) MagicMark™ XP标准品;10 μL;(7)人IgG,6 μg;(8)人IgM,6 μg;(9)大肠杆菌裂解液,10 μg;(10) Novex® Sharp未染色标准品,10 μL。

误区:预制胶太贵了

事实:使用Novex® 预制胶不仅能节约时间和宝贵的样品,还能节约经费

30多年来传统的凝胶分离基本没变。使用Novex® 预制胶带来以下明显优势:
• 制备时间更短——远离自己灌胶的麻烦,您可以更快获得结果,并进入流程中的下一步
• 实验间的一致性更佳——我们的蛋白凝胶经过严格的质量控制,能最大限度地降低实验间的差异,帮助您获得更加准确的结果

别落伍。拿起Novex® 凝胶,让您的分离工具与时俱进。

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