全新的萤光素酶报告基因系统[新品推荐]

赛默飞世尔旗下Pierce全新推出了萤光素酶报告基因系统。 该系统包含五种不同的萤光素酶报告基因以及一系列相应的检测试剂，可用于基因调控研究。这些萤光素酶基因分别编码Gaussia萤光素酶、Gaussia-Dura萤光素酶、海萤 （Cypridina）萤光素酶、海肾（Green Renilla）萤光素酶或红色萤火虫（Red Firefly）萤光素酶。它们既可用于单报告基因检测，也可通过特殊组合进行双报告基因检测。

近年来，生物发光分析已越来越多地应用在生物学和医学研究中，作为荧光和化学发光检测的补充或替代。生物发光 vs. 荧光，它们的区别在哪里？生物发光是由萤光素酶与其底物的反应发出的，如萤火虫萤光素酶和萤光素。取决于所使用的萤光素酶，可能需要不同的辅助因子（如ATP、O2）。荧光则是荧光基团（FITC等）吸收光源的能量，发射出不同波长的光能量的产物。

尽管生物发光和荧光都广泛应用于科学研究中，但生物发光报告基团表现出超灵敏的检测能力和更宽的动态范围。在基于细胞的分析中，荧光基团容易光漂白，量子产量较低。此外，有些细胞组分能够自发荧光，这样就增加了非特异性背景，且降低了荧光检测的灵敏度。因此，生物发光分析表现出更高的灵敏度。不过，在观察活细胞中的目标时，荧光则更有用，因为荧光基团不需要辅助因子或底物，也比生物发光报告基团更加稳定。

Pierce此次推出的五款萤光素酶报告基因是根据人类密码子优化的，适用于哺乳动物的表达。Gaussia、Gaussia-Dura和海萤 （Cypridina）萤光素酶蛋白是分泌到细胞培养上清中，实现了报告基因活性的活细胞监控。这些分泌型萤光素酶所产生的光信号比天然的萤火虫或海肾萤光素酶要强得多。尽管85%的萤光素酶蛋白都分泌了，但剩下的部分可在裂解液中稳定检测，这有助于多重分析。

海肾（Green Renilla）萤光素酶是一个细胞内蛋白，与天然的萤火虫或海肾萤光素酶相比，血清稳定性更高，且光产量更高。因此，海肾（Green Renilla）萤光素酶分析更加灵敏。红色萤火虫（Red Firefly）萤光素酶也是个细胞内蛋白，其发射峰偏移至红色光谱，能与其他萤光素酶组合使用。

萤光素酶报告基因的光谱发射图

萤光素酶报告基因系统是以闪光型（flash type）和辉光型（glow type）这两种形式提供的。在此科普一下：

闪光型分析提供了短暂但强烈的突发光，灵敏度最高。因此，闪光型分析试剂可能需要使用带试剂注射器的萤光光度计（luminometer），让信号强度最高，且可变性减小。相反，辉光型分析提供了较低强度但持续时间更长的信号，适合高通量分析，且不需要试剂注射器。

Thermo Scientific Pierce萤光素酶报告基因产品具有以下优点：

● 实时监测——分泌型萤光素酶，无需破坏珍贵的细胞样品即可进行实时动力学研究
● 多重检测——可同时使用多种萤光素酶报告基因，且一步即可实现多重萤光素酶的检测
● 灵敏度更高——信号强度增强100-1000倍，只需很少细胞即可完成检测，节约样品，减少试剂消耗

萤光素酶报告系统选择指南

萤光素酶	Cypridina	Gaussia	Gaussia-Dura	Green Renilla	Red Firefly
底物	种虾素	腔肠素	腔肠素	腔肠素	D-萤光素
样品类型	培养上清、裂解液			裂解液
在闪光型分析中的相对亮度	107（培养上清） 106（裂解液）			107	105
闪光型分析的平均半衰期	30分钟	< 5分钟	n/a	5分钟	> 30分钟
辉光型分析的平均半衰期	1小时	n/a	1小时	3小时	2小时

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