这是一个陷阱!新技术捕获miRNA靶标

【字体: 时间:2012年05月11日 来源:生物通

编辑推荐:

  MicroRNAs(miRNA)可通过与RNA诱导的沉默复合物(RISC)结合,识别靶标mRNA从而抑制基因表达。一项称为miR-TRAP的简单新技术可以捕获这一复合物,从而使研究人员更易于鉴别出miRNA的靶标。

  

生物通报道  MicroRNAs(miRNA)可通过与RNA诱导的沉默复合物(RISC)结合,识别靶标mRNA从而抑制基因表达。一项称为miR-TRAP的简单新技术可以捕获这一复合物,从而使研究人员更易于鉴别出miRNA的靶标。

人类细胞被认为可以生成成千上万种不同的miRNAs——小片段遗传物质可帮助确定特定时间内哪些基因开启或关闭。miRNAs是正常细胞功能的重要组成部分,它们也可以导致疾病发生——例如某些在特异的肿瘤中表达增高,促进了细胞生存。为了更好地了解miRNAs影响健康和疾病的机制,研究人员首先需要知道哪些miRNAs会对哪些基因起作用——鉴于其庞大的数量这是一个巨大的挑战,事实上每一个miRNA都能够调控数以百计的靶基因。miR-TRAP,这种简单易用的新方法可在细胞中直接鉴别出miRNA靶标。这一技术是由美国桑福德-伯纳姆医学研究所的教授和项目主任Tariq Rana博士及研究团队开发的,相关论文首次发表在5月8日的《Angewandte Chemie International Edition》杂志上。

Rana 说:“这种方法可以被广泛应用于生理条件下任意数量的疾病模型中发现miRNA靶标。miR-TRAP将有助于在RNA领域的缺口处搭起桥梁,使研究人员能够更好地了解诸如癌症等疾病,靶向它们的遗传基础开发出新的诊断和治疗策略。随着新的高通量RNA测序技术不断增加已知miRNAs和它们的靶标数量,这一点将变得尤为重要。”

miR-TRAP运作机制

miRNAs并非是直接结合DNA,而是结合到信使RNA(mRNA)上来阻断基因表达。mRNA通常会将DNA的信息带出细胞核,进入到细胞质,在细胞质中将序列翻译为蛋白质。这些RNAs被一组称为RNA诱导沉默复合物(RISC)的蛋白质结合,可阻断mRNA编码生成蛋白质,从而对细胞产生广泛的影响。

操作miR-TRAP可分为三个基本步骤。科学家们首先通过共轭补骨脂素(一种可通过光激活的植物分子)生成针对目的miRNA的高度光反应探针,第二步完成长波紫外线光交联反应,第三步拉下(pull down)RNA,并用RT-qPCR对其进行分析。换句话说,研究人员利用紫外线光杀死细胞,将miRNA/mRNA双双冷冻在适当的位置。随后从细胞中抽提出RNA,他们可以进一步检测结合mRNA序列,揭示miRNA的靶基因。

miR-TRAP的优势

miR-TRAP相比当前用于鉴别miRNA靶标的方法更简单,更精确。原因包括三个方面:首先miR-TRAP可在正常或疾病情况下直接在活细胞中鉴别miRNA靶标。第二,这一技术不仅可以识别出miRNAs抑制的mRNA靶标,还可以识别出蛋白质翻译被抑制的mRNA——这一点通过其他技术,例如qPCR或微阵列分析通常无法获得。第三,miR-TRAP不依靠抗体,不会导致非特异性背景信号,使数据解析变得简单。

将miR-TRAP付诸检验,Rana和他的研究团队,包括博士后研究人员Huricha Baigude对两个重要microRNAs的13个预测靶标进行了分析。这一技术不仅证实了已知的基因靶标,还揭示了两个新的靶标。

Rana 说:“我们现在应应用这些方法在一些疾病模型中鉴别miRNA靶标。我们希望miR-TRAP将很快能广泛应用到世界各地的实验室中。”

生物通推荐新闻来源:

It's a trap! New laboratory technique captures microRNA targets

MicroRNAs suppress gene expression by binding target mRNA and joining an RNA-induced silencing complex. A simple new technique called miR-TRAP captures the complex, allowing researchers to more easily identify an miRNA's target. Credit: Sanford-Burnham Medical Research Institute

相关新闻
生物通微信公众号
微信
新浪微博
  • 搜索
  • 国际
  • 国内
  • 人物
  • 产业
  • 热点
  • 科普
  • 急聘职位
  • 高薪职位

知名企业招聘

热点排行

    今日动态 | 生物通商城 | 人才市场 | 核心刊物 | 特价专栏 | 仪器云展台 | 免费试用 | 今日视角 | 新技术专栏 | 技术讲座 | 技术期刊 | 会展中心 | 中国科学人 | 正牌代理商

    版权所有 生物通

    Copyright© eBiotrade.com, All Rights Reserved

    联系信箱:

    粤ICP备09063491号