Western不仅要快,更要可靠[新品推荐]

【字体: 时间:2012年05月04日 来源:生物通

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  平常,从PAGE胶的制备到蛋白电泳再到蛋白转印,能在一上午完成的,那都是高手。如今,借助V3 Western Workflow,整个过程只需1个小时,人人都能当高手。当然,节约时间固然好,结果好才是更重要。这个流程究竟有何与众不同之处呢?且听我慢慢道来。

Western blot的操作流程不仅繁冗,还不见得可靠。为此,各大公司也在努力解决这一问题。Bio-Rad公司近日推出了V3 Western Workflow,这一产品线不仅能帮助您节约时间,还能确保Western流程中的每一步获得可靠的结果。

平常,从PAGE胶的制备到蛋白电泳再到蛋白转印,能在一上午完成的,那都是高手。如今,借助V3 Western Workflow,整个过程只需1个小时,人人都能当高手。当然,节约时间固然好,结果好才是更重要。这个流程究竟有何与众不同之处呢?且听我慢慢道来。

V3 Western Workflow包含5步:

1. 蛋白电泳。利用Criterion™ TGX Stain-Free™和Mini-PROTEAN® TGX Stain-Free预制胶。
2. 观察分离。利用ChemiDoc™ MP成像系统。
3. 蛋白转印。利用TransBlot® Turbo™转印系统。
4. 转印验证。利用ChemiDoc™ MP成像系统。
5. Western blot验证。利用ChemiDoc™ MP成像系统。

第1步:蛋白电泳

Bio-Rad独特的Criterion™ TGX Stain-Free™和Mini-PROTEAN® TGX Stain-Free预制胶让我们最快可在15分钟内分离样品。Criterion Stain Free凝胶成像系统我们之前介绍过,也被生物通读者评为2008生命科学十大创新产品之一。这种技术源于2002年发表在《Analytical Biochemistry》上的一篇文章。文中指出聚丙烯酰胺中的蛋白可以进行快速检测。方法是将蛋白胶浸泡在三氯乙酸或氯仿中,然后通过紫外光照射。在三氯化合物存在时,紫外光会驱使色氨酸发生反应,产物会发出可见区内的光,从而实现蛋白条带在胶上的定位。Bio-Rad公司利用了这项技术,并进行了一定的改进,开发出这套Stain-Free的凝胶成像系统。。

新的TGX Stain-Free™预制胶经过改进,保质期更长(长达12个月),包含独特的三卤化合物,可在Gel Doc™ EZ和ChemiDoc™ MP成像系统上实现蛋白的荧光检测。Criterion预制胶适用于Criterion电泳槽,而Mini-PROTEAN预制胶适用于我们常用的小型垂直电泳槽Mini-PROTEAN。使用TGX Stain-Free™预制胶,在300V电压下,20几分钟即可完成电泳。

第2步:观察分离

之前,我们一般是通过蛋白Marker的电泳情况来估计蛋白的分离状况。现在,有了上面的Stain-Free预制胶,蛋白分离的观察就轻松多了。我们将跑完的预制胶放入ChemiDoc™ MP或Gel Doc™ EZ成像仪中,只需1分钟,即可对蛋白分离情况了如指掌。

ChemiDoc™ MP成像仪是Bio-Rad去年推出的全能型成像分析系统。该系统可以进行普通成像、化学发光成像、多通道荧光成像,是一台大而全的新系统。而Gel Doc™ EZ是一款简单易用、高性能的自动凝胶成像系统。只需一个按键,即可对蛋白电泳凝胶、DNA凝胶、RNA凝胶、stain-free凝胶等样品进行全自动图像采集并进行定性和定量分析,得到高质量的可重复的结果。

第3步:蛋白转印

蛋白的转印也是各厂家必争之地。近几年,多个厂家推出了快速转印系统,不断缩短转印时间。如今,使用TransBlot® Turbo™转印系统和TGX Stain-Free预制胶,最快3分钟即可完成转印。科技果然是第一生产力啊,当年我们都是将转印安排在中午,吃顿饭的工夫才能完成,如今喝杯水的时间就搞定了。

TransBlot® Turbo™转印系统,又称全能型蛋白转印系统,一次可转印四块mini胶或两块midi胶;两个转印盘设计,各转印盘可分别运行。整个转印过程只需要7分钟即可完成,如果选用TGX预制胶,实验时间更可缩短至3分钟。Bio-Rad采用了一种新配方的转印缓冲液,并使用了一种特殊材质的滤纸。这种组合能够承受更大电流,使转印不仅更快,而且更完全。而且,与湿转、半干式转印相比,蛋白转移效率更高。

第4步:转印验证

利用ChemiDoc MP,可以对PVDF或NC膜上的蛋白进行观察,即时检查蛋白转印的效果,而不再需要丽春红染色和脱色。

加州大学戴维斯分校的Aldrin Gomes博士在使用后谈道:“我们用ChemiDoc MP来确保凝胶转印没有问题。它比丽春红染色要简单得多。通过这一步,我们可以自信地继续做下去,而不会浪费抗体。”

以上4步,过去起码要一个上午的时间才能完成,还得手脚麻利,精心安排每一步,而如今,一个小时就搞定了。使用其他的预制胶,当然也能完成,但你不能实时了解电泳和分离的情况,始终心里没底。所以说,TGX Stain-Free预制胶还是相当好使,当然,如果价格便宜一些就更美了。

第5步:Western blot的验证

研究人员常常会用看家蛋白来标准化实验数据,有时是将抗体剥离,再重新杂交,有时是用多个抗体同时杂交。过程比较麻烦,结果还不一定准确。研究表明,内参也会有变化(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15627964)。而利用ChemiDoc MP系统的免染检测,研究人员可定量总蛋白,用于实验的标准化。这种总蛋白标准化方法更快,也更准确。

有了V3 Western Workflow,相信Western可以开展地更有自信。(生物通 薄荷)

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