ECL Prime蛋白印迹试剂之使用心得[心得点评]

Amersham ECL Prime是ECL家族的新成员。它在灵敏度方面至少是ECL plus的两倍，其最低检测限（LOD）达到pg级。此试剂的特点在于大幅增加了信号的稳定性，这使得反复曝光变成可能，并能够在一个实验中轻松地进行多个印迹处理。

编者按：产品好不好，用过才知道。在选购产品时，参数固然重要，但过来人的评论似乎更有意义。为此，生物通收集了多名用户的使用体验，真实地告诉您产品优缺点是什么，到底好不好用，让您买的放心，用的舒心。这一次，我们先从Western blot开始。

说到ECL，做Western blot的人几乎没有不知道吧。自1990年上市以来，增强化学发光（ECL）蛋白印迹产品库不断丰富，以适应常规蛋白检测到更为复杂的应用。有了ECL，蛋白分析比以往更加快速，也更加灵敏。

Amersham ECL Prime是这个家族的新成员。它在灵敏度方面至少是ECL plus的两倍，其最低检测限（LOD）达到pg级。此试剂的特点在于大幅增加了信号的稳定性，这使得反复曝光变成可能，并能够在一个实验中轻松地进行多个印迹处理。

此外，ECL prime所发射的信号强度提高了3到5倍，这也就意味着ECL prime可采用比ECL plus低3倍的一抗和二抗进行检测，这不仅降低了背景，也节省了抗体的费用。

斯坦福大学的Hugo Hilton博士在Western blot实验中就使用ECL。前面的步骤就不赘述了。对于化学发光检测，他将1 mL ECL Prime检测试剂溶液A与1 mL溶液B混合，加到NC膜上，在室温下孵育5分钟。然后用保鲜膜把膜包起来，放在X光胶片暗盒内。在暗室中放入X光胶片，曝光1、3、5分钟，显影。

Hilton认为，ECL Prime的灵敏度非常高。厂家的使用说明中提到该试剂能检测低至1 pg的目的蛋白。在使用过程中，他们也的确能检测到其他化学发光试剂所检测不到的目的蛋白。X光胶片曝光3分钟能带来良好的信号，适合条带的定量分析。

正是由于ECL Prime的灵敏度高，Hilton在实验中对一抗和二抗进行了更高倍数的稀释，至少是其他试剂的5倍，这也节省了不少一抗的费用。Hilton还提到，在与ECL试剂共同孵育时，一定要确保膜被试剂完全覆盖。

其他用户也认为ECL Prime是个灵敏、易用的检测试剂。泰国玛希隆大学的Narisorn Kitiyanant提到：“这是个非常灵敏的ECL。有时在倒入膜中之前，我们会用蒸馏水将其稀释。它需要孵育5分钟，就这么简单。”波多黎各大学癌症中心的Magaly Martinez-Ferrer认为：“使用起来非常简单。有时只孵育1分钟。背景很低。”

如此看来，ECL Prime的确是个人见人爱的好东西哦。GE Healthcare目前提供两种规格，分别为50 ml和150 ml的包装，适合1000 cm²和3000 cm²的膜。对于用量大的实验室来说，大包装无疑更划算。（生物通 余亮）

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