使用自动细胞计数器的三个tip[心得点评]

【字体: 时间:2013年03月20日 来源:生物通

编辑推荐:

  市场上近几年涌现出不少自动细胞计数器。这种仪器利用光学显微镜技术,但带来了更高的准确性、重复性,并将这一单调的工作自动化。样品体积小也是这种细胞计数器的额外优势。在此,专家介绍了使用自动细胞计数器的三个tip。

市场上近几年涌现出不少自动细胞计数器。这种仪器利用光学显微镜技术,但带来了更高的准确性、重复性,并将这一单调的工作自动化。样品体积小也是这种细胞计数器的额外优势。许多仪器使用一次性的玻片,只需要10-20 uL样品。将玻片插入自动细胞计数器中,照相机捕获图像。随后内置的软件分析图像,显示细胞数量等信息。

在此,专家介绍了使用自动细胞计数器的三个tip。

准确对焦

与其他光学显微镜一样,仪器的准确对焦对于精确计数很关键。在手动计数时,训练有素的大脑可轻松鉴定细胞。然而,自动细胞计数器内的照相机检测活细胞的亮中心和暗边缘,将其处理成黑白像素信息。如果细胞未准确对焦,那么亮中心将有明显的灰度,会被误认为是死细胞。

大部分研究人员将会发现对焦并不难,只要显示在屏幕上的图像质量与传统的显微镜相似。确保你有一张清晰的图像,这很重要。另一点是要了解细胞计数器中照相机的分辨率。如果自动细胞计数器以低的帧速显示,如每秒小于15帧,那么显示的图像将不能实时响应聚焦旋钮的微调。

控制玻片之间的差异

大部分基于图像的自动细胞计数器都使用一次性的玻片,其上有明确的测量区域。这一测量区域被物镜的放大率和照相机的图像传感器大小所设定。这些细胞计数器通常测定0.4-0.5 uL样品,相当于血球计数器的4-5个大方格。

与血球计数器不同,计数玻片通常只使用一次。因此,玻片之间的差异会显著影响细胞计数的结果。对于某一组实验,最好使用同一批号的玻片,尽量避免这些差异。在更换批号时,也建议用标准的微珠来检验玻片。大部分细胞计数器制造商都提供已知浓度的标准微珠。使用相同的微珠样品来检验不同的玻片,将有助于发现差异。

评估软件的分簇性能

自动细胞计数器的核心是开展分析的软件,它相当于手动计数时的人脑。大部分的自动细胞计数器包含集成软件,能准确地计算单细胞群体的数量。然而,在谈到成簇细胞的计数时,细胞计数器就会存在明显差异。由于从培养细胞中获得的样品并不总是单细胞群体,因此,有时会有多个细胞团块,而自动细胞计数器的分簇(declustering)性能也必须仔细评估。评估分簇性能时可开展图1的检测。

图1. 将HL-60细胞加热到70°C,处理20分钟,杀死细胞,获得死细胞样品。随后利用两款不同的自动细胞计数器进行样品的检测。在细胞计数之后,根据软件捕获的图像进行比较。红色圆圈:死细胞;蓝色圆圈:活细胞;黑色圆圈:排除的对象。

自动细胞计数器正在取代单调乏味的手动计数方法。随着对一些基本原理的了解,自动细胞计数器将帮助你获得最佳的结果。(生物通 薄荷)

了解Invitrogen Countess计数器的更多信息

订阅生物通快讯

订阅快讯:

最新文章

限时促销

会展信息

关注订阅号/掌握最新资讯

今日动态 | 人才市场 | 新技术专栏 | 中国科学人 | 云展台 | BioHot | 云讲堂直播 | 会展中心 | 特价专栏 | 技术快讯 | 免费试用

版权所有 生物通

Copyright© eBiotrade.com, All Rights Reserved

联系信箱:

粤ICP备09063491号