Science技术指南:Western Blot新品新技术

【字体: www.ebiotrade.com 时间:2013年03月05日 来源:生物通

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  自1981年W. Neal Burnette将这种蛋白印迹技术正式命名为“Western Blot”以来,Western Blot已经走过了三十二个春秋了,对于这种用于鉴别特殊蛋白质的技术方法,目前已经涌现出了许多新产品,新技术,用以改善其可重复性,灵敏性,可测性,以及实验速度。为此Science杂志以此为主题,推出了最新一期的技术专题。

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生物通报道:自1981年W. Neal Burnette将这种蛋白印迹技术正式命名为“Western Blot”以来,Western Blot已经走过了三十二个春秋了,对于这种用于鉴别特殊蛋白质的技术方法,目前已经涌现出了许多新产品,新技术,用以改善其可重复性,灵敏性,可测性,以及实验速度。为此Science杂志以此为主题,推出了最新一期的技术专题。

工作原理

简单而言,Western blot就是通过凝胶电泳,分离不同大小的蛋白,然后进行转膜(通常是硝化纤维素或PVDF),将滤纸和膜浸泡在缓冲溶液中的方法称为湿转。此后又发展出了干转和半干转移,这两种方法比传统的湿转方法更快,也更规整,但是对于高质量的蛋白而言,效率更低。

对于半干转印方法来说,膜和凝胶被放置在缓冲液浸泡的滤纸之间,加上阳极和阴极,电流就能驱动蛋白转移到膜傻瓜。三种方法中,干法转膜最快,但转印效率也最低。

转膜结束后,进行封闭,再上一抗二抗,进行检测。检测方法通常是化学发光或者荧光方法,前者是通过酶光化学反应,成像设备检测结果,而后者则是通过带有荧光基团的抗体探针进行检测。荧光检测方法的主要优势在于可以同时检测多个蛋白,并且其信号更一致,因此也更有利于量化研究。

目前不少公司都推出了相关设备,软件和消耗品,令Western Blot实验更加简单,更加有效,同时还在实验中加入了一些验证点,从而研究人员能随时监测实验发展,甚至修改实验步骤。

如何加速免疫检测过程

在整个Western Blot实验过程中,转膜,封闭,抗体孵育,洗涤等步骤占据了一大半的时间,因此不少公司围绕这些方法进行了优化。比如EMD Millipore公司推出的SNAP i.d. 2.0系统,就能通过真空驱动技术和内置分流槽,加速转膜过程,而不仅仅是依赖于扩散作用。这一系统能将转膜的四个小时,缩短到30分钟,其Western blotting 产品部经理Michele Hatler表示,“我们确实改善了estern blotting实验进程中的工作效率。各种步骤都是按照传统的方法进行,我们只是加了一个真空。”

最新的2.0版本,是2012年9月推出的,相比于其之前的版本进行了几个方面的改进,比如扩展了应用范围,现在能用于中等大小的凝胶(8.5 cm*13.5 cm)和小型凝胶(7.5 cm*8.4 cm),以前则只能用于小型凝胶。

“这一设备很便宜,操作也很简单,而且切实提高了实验效率,节约了时间”,Hatler说。(SNAP i.d. 2.0系统更详细资料>> >>

此外Bio-Rad也推出了一种称为Trans-Blot Turbo的蛋白转移系统,其关键技术点在于其新配方转印缓冲液,以及一种特殊材质的滤纸,这样就能增加电流,使转印更快(推荐使用集成电源),这一系统最快能在三分钟内完成蛋白印迹实验,而典型的半干转印方法通常需要15-60分钟,才能完成一次完成的印迹,并且对于高分子量蛋白而言,结果并不是十分理想。(Trans-Blot Turbo系统更详细资料>> >>

 

 

后续文章:增加检测点,更好的定量,重塑WB等……

原文摘选:

LIFE SCIENCE TECHNOLOGIES
Not Your PI's Western Blot
More than three decades after its invention, the Western blot remains a crucial tool for investigators who need to reliably identify specific proteins. A host of recently released products use a variety of approaches to improve the reproducibility, sensitivity, quantifiability, and speed of Western blot experiments.

 

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