轻松捕获microRNA的靶标[新品推荐]

microRNA（miRNA）分子虽小，却在基因表达的调控上发挥着重要作用。为了更好地了解miRNA影响健康和疾病的机制，我们首先需要知道miRNA会对哪些基因起作用。然而，这并非易事。每个miRNA都能够调控数以百计的靶基因。之前的miRNA靶标预测主要是通过一些算法来实现，而Clontech公司（Takara旗下）近日推出一种新工具，能协助鉴定细胞中的miRNA靶标。

这一工具名为MirTrap系统。它利用RISC蛋白的显性失活突变体，允许miRNA与其靶标结合，但限制进一步的加工。此亚基整合到内源的Argonaute/RISC复合物中，并“锁定”miRNA-靶标mRNA。显性失活亚基上的DYKDDDDK（FLAG表位）标签允许整个Ago/RISC复合物的捕获和分离。这样就能实现miRNA及其靶标的免疫沉淀，从而通过新一代测序或定量PCR来鉴定或定量。

整个过程大致如下：

1. 创建miRNA模拟物。
2. 将这些miRNA模拟物和pMirTrap载体共转染到哺乳动物细胞，并孵育24小时。同时利用miR-132、pMirTrap载体和pMirTrap对照载体开展对照转染。
3. 利用附带的MirTrap分离试剂盒裂解转染后的细胞培养物。
4. 利用分离试剂盒中的磁珠对RISC复合物（其中包括靶标mRNA）进行免疫沉淀。
5. 利用附带的NucleoSpin RNA XS试剂盒分离与磁珠结合的靶标mRNA。
6. 通过qPCR或新一代测序分析分离出的RNA，鉴定出特定miRNA的靶标mRNA。

MirTrap系统中包含了pMirTrap载体、免疫沉淀及后续分离所需的试剂、Xfect microRNA转染试剂以及对照试剂，足够15次分析使用。

Xfect microRNA转染试剂也是Clontech最新推出的产品。它形成可生物降解的纳米颗粒，从而实现miRNA的高效转染。此试剂盒提供两种转染聚合物：Xfect MicroRNA Transfection Polymer，这是为小RNA的转染而优化的；Xfect Polymer，这是为质粒DNA而优化的。

在miRNA转染时，只需要Xfect MicroRNA Transfection Polymer；而在miRNA与质粒DNA的共转染时，须在转染反应中加入少量的Xfect Polymer。转染过程可在血清存在时开展。（生物通 余亮）

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