Western不再有压力 半天轻松完成[新品推荐]

【字体: 时间:2014年01月16日 来源:生物通

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  最近几年,在Western blot领域,有不少新产品上市,它们能加快实验进程,将我们从繁重的体力劳动中解放出来,还能改善实验结果。下面,就让生物通带你来看看这些“高端大气上档次”的产品,特别是后面两种“神器”,关键时候也许能帮你一把。

Western blot的原理虽简单,但步骤多,过程长,往往需要反复优化,才能获得满意的结果。过去,每个新人的Western blot经历,都是一段心酸的血泪史。在清晨踏着露珠出发,在夜晚顶着星星回家,只是为了在当天看到Western blot的结果。然而,漂亮结果有时却是千呼万唤也不出来。这个时候,老板的脸色可真是不忍细看。

最近几年,在Western blot领域,有不少新产品上市,它们能加快实验进程,将我们从繁重的体力劳动中解放出来,还能改善实验结果。下面,就让生物通带你来看看这些“高端大气上档次”的产品,特别是后面两种“神器”,关键时候也许能帮你一把。

35分钟电泳

配胶,是Western blot万里长征中的第一步。虽说现在的胶槽不断改进,配胶越来越方便,漏胶等“意外事故”也相对比较少发生了,但手工配制的凝胶过程仍然是一件不太稳定不太均匀的事情,即使制胶过程每个步骤看起来都完美,跑胶后一看常常出现各种莫名其妙的条带扭曲变形模糊拖尾等情况,还真让人抓狂。有时间你尽管慢慢耗,对于稀有样品或者时间紧迫条件下,即开即用的预制胶当然是最好的选择。

Life Technologies的Blot™ Bis-Tris Plus凝胶就是专为Western blot而设计,可让您获得更清晰的条带。与传统的Tris-甘氨酸凝胶不同,Bolt™ Bis-Tris Plus凝胶采用Bis-Tris-HCl缓冲液(pH 6.4),工作pH约为7.0。这种中性pH配合独特而温和的样品制备实验方案可使您的蛋白质样品始终处于温和的非酸性条件,从而保护蛋白质的完整性并最大程度减少对蛋白质的修饰,确保每次均获得高度灵敏且准确的蛋白质印迹。

与经典的NuPAGE预制胶一样,Blot™ 预制胶具有极佳的条带分辨率、条带质量,而批次间一致性就更不必说了,将手工制胶甩出几条大街。有了Blot™ 预制胶,您将不再看到“笑脸”、斑点或拖尾,取而代之的将是sharp的条带。。

有时,为了检测低丰度蛋白,您需要上样较多的样品,当然,这不能强求,因为上样量过大,样品会溢到相邻孔中,造成污染。而对于Blot™凝胶,您就完全不必担心了。它采用全新的专利楔形孔,使得每孔的蛋白上样量增加了一倍。10孔的Blot™凝胶最多可上样55 μL。

与Blot™凝胶配套使用的是Blot™ Mini电泳槽。这种电泳槽采用两个并排的电泳槽结构,可同时观察两块凝胶,也更节约电泳缓冲液。同时,它采用新型的白色电泳槽底板,更方便观察预染marker。利用Blot™ Mini电泳槽和Blot™凝胶,蛋白电泳可在35分钟内完成。而以前的配胶加电泳,至少需要两个小时吧。另外,NuPAGE预制胶也是可以在Bolt槽上运行的哦!

这么高大上的预制胶,看着虽然很美,但价格就不太美了。不过,如果赶上神马促销优惠,还是挺划算的。Life Tech有个迎新套装,购买后即可免费获赠Blot™ Mini电泳槽。

7分钟转印

以往,转印需要数小时完成,而如今一些新仪器让转印时间大大缩短。Life Tech之前推出的iBlot® 干式转印系统因7分钟的转印而大受欢迎,目前已有2000多篇文献引用。正如一位研究人员所说:“之前,我们转膜通常要花2小时以上,如今,7分钟就完成了。我再也不用担心不能按时回家了。”的确,一台方便的仪器,不仅能快速带来结果,也让我们能享受到更多的家庭欢乐。

Western不再有压力,半天轻松完成

如今,iBlot干式转印系统已升级到第2代。iBlot 2在原有快速转印系统的基础上,具有更加美观和牢固的工业设计。它采用时下流行的触摸屏设计,让操作更加简洁友好。仪器预设6种操作程序,当然,您也可以根据目标蛋白来自定义新程序,满足不断变化的实验需求。

在转印时,我们需要使用iBlot 2凝胶转印膜组。这个膜组分顶部和底部两个部分。顶部含铜质阴极和iBlot阴极转印膜组,而底部除了铜质阳极和iBlot阳极转印膜组外,还包含一张0.2 μm孔径的NC膜或PVDF膜。这些膜组中已包含阴极和阳极缓冲液,无需配制缓冲液。电泳完成后,取出凝胶,组装转印膜组,赶走气泡,即可开始转印。只需7分钟就能完成蛋白的高效转移。与湿式或半干式转印相比,时间更短,且检测灵敏度更高。

iBlot 2转印装置适用于多种不同化学成分的预制胶或自制胶,并有两种尺寸的转印膜组可供选择。您若是转印一块中型凝胶(8x13 cm)或两块微型凝胶(8x8 cm),可以选择普通型转印膜组。若是只有一块微型凝胶,可以选择迷你型转印膜组。

怎么样?心动了吧。还在为价格而犹豫?告诉您个好消息。即日起至2014年6月30日,购买1台iBlot 2凝胶转移仪,即可免费获赠4盒转印膜组(2盒普通型+2盒迷你型),PVDF或NC任选。抓住机会哦!

自动化封闭+孵育

到这里,Western blot最痛苦的阶段似乎已经过去,剩下便是按部就班的封闭、一抗和二抗孵育了。但每隔一两个小时的换液,重复3次、每次3分钟的洗涤也让您脱不开身。若是有一台仪器,能够像面包机一样,加入各种试剂,所有孵育和洗涤均能自动化完成,那可就太方便了。Life Tech果然推出了一款Western blot中的面包机——iBind™全自动蛋白印迹处理系统。

这台仪器无需手工操作,即可重复、快速地自动完成Western blot中的封闭、一抗和二抗孵育及所有洗涤步骤,将您从繁杂的实验操作中解放出来。同时,避免人为因素影响,提高实验的可重复性。

iBind小巧轻便,大小仅为24.2 cm x 14.6 cm x 3.5 cm(长x宽x高),比iPad Mini略大一点。更为神奇的是,它不需要外部电源,在实验室的任何地方都能使用。究竟是如何实现的呢?这要归功于一种名为顺序侧流(Sequential Lateral Flow,简称SLF)的新技术。

在操作过程中,我们需要一种iBind™卡片。将iBind™卡片置于仪器中,并加入缓冲液后,将印迹膜放在卡片上,赶走气泡。之后,依次加入抗体和溶液。SLF技术通过在iBind卡片上施加机械压力,让一抗和二抗及时释放。iBind卡片内嵌入的玻璃纤维使得抗体和洗涤液以恒定的速度流过印迹膜。而卡片一端的吸附膜组可以使液体流过卡片及膜。这样,您加入试剂后即可离开,系统自动完成封闭、一抗和二抗孵育及所有洗涤步骤。

对于多种抗体而言,相对于手动方法,iBind系统带来了更高的灵敏度,更低的背景,以及更佳的印迹间一致性。此外,实验流程也大大缩短,从原来的十几个小时缩短到2.5小时,而设置时间也仅需15分钟。这些步骤完成后,印迹膜即可取出,利用Novex®化学发光检测试剂盒来进行检测。这一即用型试剂盒专为iBind而设计,可实现fg级的超灵敏检测,且信号持续5天。

目前,Life Technologies提供iBind™起始套装,内含一台iBind蛋白印迹处理仪、一盒iBind 卡片(10张)和一个iBind溶液试剂盒,让您能立即开始操作。这个卡片和溶液都是耗材,之后还需购买。每张卡片可运行一张迷你的膜。

如今,有了这一整套工具,Western blot不再是噩梦了吧。只需一上午的时间,我们就能从蛋白电泳、转膜到印迹检测,获得准确又可靠的结果。有了好的结果,还愁没有好的paper吗?(生物通 余亮)

Western不再有压力,半天轻松完成

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