复旦大学等《Clinical Cancer Research》解析前列腺癌治疗新靶点

　　

生物通报道：2014年4月7日，在国际癌症研究领域著名期刊《Clincal Cancer Research》发表的一项研究中，来自复旦大学、同济大学和合肥第一人民医院的研究人员，将miR-133b和RB1CC1确定为前列腺癌生化复发的独立预测因素和潜在的治疗靶点。

本文的通讯作者分别为复旦大学生命科学学院的李瑶教授和同济大学附属同济医院泌尿外科的副主任医师李涛博士。参与单位还包括合肥第一人民医院。此项研究由国家自然科学基金资助。

前列腺癌（Prostate cancer），是男性生殖系最常见的恶性肿瘤，发病随年龄而增长，其发病率有明显的地区差异，欧美地区较高。据报道仅次于肺癌，在男性是癌症死亡的第二位。我国以前发病率较低，但由于人口老龄化，近年来发病率有所增加。据报道，2010年美国有近217,730前列腺癌新病例被确诊。推荐阅读：PNAS：前列腺癌干细胞是 “移动的治疗靶点”。

到目前为止，根治性前列腺切除术（RP）是局部性前列腺癌的标准疗法。然而，约有25%到50%的患者在术后的长期随访中出现生化复发（BCR，生化复发是指在根治性治疗手段实施后，血清PSA值再次升高，目前通常将根治性手术后血清PSA≥0.4ng/ml，或根治性放疗后在PAS最低值基础上PSA值上升超过0.2 ng/ml定义为前列腺癌的生化复发）。生化复发通常是前列腺癌进展发生临床局部复发和远处转移的前兆。因此，利用灵敏的方法和特定的肿瘤标志物早期对BCR风险进行检测，可有效改善前列腺癌患者的预后。

据报道，在雄激素通路和前列腺癌的发生过程中，雄激素发挥了举足轻重的作用。雄激素受体（AR）可调节雄激素依赖性基因转录。许多AR调控基因，是前列腺发育和维护的重要调节因子。最近，有新证据表明，改变了的microRNAs（miRNA）调控，可能参与了AR信号转导和前列腺癌的发病机制。

miRNAs是细胞内短的内源性RNA，可促进翻译抑制和/或破坏靶mRNAs，优化许多生物过程中的蛋白质水平。MicroRNA-133b (miR-133b)位于染色体6p12.2，在几种实体肿瘤中表达下调。据报道，miR-133b在不同类型的癌症中发挥肿瘤miR（oncomiR）或肿瘤抑制因子的功能。然而，很少有研究集中于miR-133b在前列腺癌中所起的作用，尤其是miR-133b表达在临床预后中的意义。

RB1CC1被确定为RB1基因的一个潜在调节因子，在染色体8q11区域被发现，这个区域包含公认的肿瘤抑制基因的多个位点。RB1CC1已被作为一个重要的信号节点，同等地调节细胞生长、细胞增殖、细胞凋亡和细胞扩散/迁移。它也与各种类型的人类癌症有关，特别是乳腺癌。然而，RB1CC1在前列腺癌中的作用，以及RB1CC1表达在临床诊断中的意义却少有报道。

在这项研究中，研究人员旨在研究miR-133b在前列腺癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡中所起的作用。他们还检测了miR-133b在前列腺肿瘤组织中的表达，并评估了miR-133b及其靶基因RB1CC1在前列腺癌症患者接受根治性前列腺切除术后的预后意义。

研究人员将miR-133b模拟物（miR-133bm）和anti-miR-133b转染到LNCaP和PC-3细胞中。分别使用CCK-8来观察细胞增殖，采用流式细胞分析来研究细胞周期，通过caspase-3确定细胞凋亡。分别采用实时逆转录PCR和原位杂交，评估前列腺细胞系和178份前列腺组织样本中的miR-133b表达。分别利用Western blot和免疫组化法检测前列腺细胞系和前列腺组织样本中的RB1CC1蛋白水平。

结果发现，miR-133b在LNCaP细胞中的过表达可促进细胞增殖和细胞周期增加，但是却抑制细胞凋亡；相反地，miR-133bm可促进细胞凋亡，但却抑制PC-3细胞中的细胞增殖和细胞周期增加。在LNCaP细胞中，沉默miR-133b的靶基因RB1CC1，可抑制细胞凋亡，并促进细胞周期增加。此外，前列腺癌组织中的miR-133b表达与RB1CC1表达呈显著负相关。多变量Cox分析表明，miR-133b和RB1CC1可能是前列腺癌生化复发的两个独立的预测因子。

总之，在更少侵略性的LNCaP细胞中，miR-133b可能提高肿瘤促进的性能，而在更具侵略性的PC-3细胞中，这个miR可能充当肿瘤抑制因子。miR-133b和RB1CC1是前列腺癌两个独立的预后指标。（生物通：王英）

注：
李瑶，女，1965年出生，博士，教授。1982-1989年就读复旦大学生命科学学院，1986年获复旦大学生物学学士学位，1989年获复旦大学生物学硕士学位，1989-1990年在四川四达生物工程公司从事生化制药的产品开发工作。1990-1993年就读复旦大学生命科学学院，1993年获复旦大学生物学博士学位，1993年至今复旦大学生命学院任教。1995年在香港科技大学生物系作博士后，1997-1999年在美国美国纽约州立大学布法罗分校生物系作博士后，1996年任副教授，2003年任教授。主要研究方向为：基因芯片技术应用研究；肿瘤基因组研究；功能基因组研究; 基因表达调控研究。

李涛，男，同济大学附属同济医院泌尿外科副主任医师，博士后，参编专著2篇，以第一作者发表学术论文10余篇，其中SCI收录6篇，参与并获得上海市科技进步奖1项，上海市医学科技奖1项。在国内较早开展前列腺癌表观遗传、微小RNA的研究，现为上海泌尿男科学会青年会员。从事泌尿外科的医疗、教学和科研工作近20年，积累了丰富的临床经验和技巧，尤其在前列腺疾病、男性不育不孕及性功能方面有专长。主要研究方向：泌尿系统肿瘤、前列腺疾病、男性不育不孕及性功能障碍、泌尿系结石及微创泌尿外科治疗。

生物通推荐原文摘要：
Identification of miR-133b and RB1CC1 as Independent Predictors for Biochemical Recurrence and Potential Therapeutic Targets for Prostate Cancer
Abstract
Purpose:We aimed to investigate the contribution of microRNA-133b (miR-133b) in prostate cancer cell proliferation, cell cycle and apoptosis. We also examined expression of miR-133b in prostate cancer tissues, and evaluate the prognostic significance of miR-133b, as well as its target gene RB1CC1 in patients with prostate cancer after radical prostatectomy. Experimental Design:miR-133b mimics (miR-133bm) and anti-miR-133b were transfected into LNCaP and PC-3 cells. CCK-8 was employed to look at cell proliferation, and flow cytometric analysis carried out to study cell cycle, and apoptosis determined by caspase-3 activity. MiR-133b expression was assessed by real time RT-PCR and in situ hybridization in prostatic cell lines and 178 prostate tissue samples, respectively. The protein level of RB1CC1 was examined by western blot and immunohistochemistry in prostatic cell lines and prostate tissue samples, respectively. Results:Overexpression of miR-133b in LNCaP cells boosted cell proliferation and cell cycle progression, but inhibited apoptosis; in contrast, miR-133bm promoted cell apoptosis, but suppressed cell proliferation and cell cycle progression in PC-3 cells. In LNCaP cells, silencing of RB1CC1, a target of miR-133b, inhibited cell apoptosis, and promoted cell cycle progression. Moreover, miR-133b expression was significantly inversely correlated with RB1CC1 expression in prostate cancer tissues. Multivariate Cox analysis indicated that miR-133b and RB1CC1 might be two independent prognostic factors of biochemical recurrence. Conclusions:MiR-133b might enhance tumor-promoting properties in less aggressive LNCaP cells, whereas this miR may act as a tumor suppressor in more aggressive PC-3 cells. MiR-133b and RB1CC1 were independent prognostic indicators for prostate cancer.