CRISPR新品巡礼：Clontech[新品推荐]

CRISPR/Cas9系统可谓是基因组编辑领域的新兴力量，但一出现，便风靡全球。与ZFN或TALEN等工具相比，CRISPR/Cas9系统带来了若干好处：简单高效、价格低廉、易于编程。它能够实现几乎任何物种内位点特异的基因组编辑。与研究人员的热情相呼应，各大公司也在争相开发商业化的产品。Clontech便是其中的一个。

CRISPR/Cas系统本是原核生物的适应性免疫应答系统，它利用非编码RNA来指导Cas9核酸酶，进行位点特异的DNA切割。这种DNA损伤可通过细胞内的DNA修复机制来修复，如非同源末端连接（NHEJ）DNA修复通路或同源定向修复（HDR）通路。

此系统经过改造，为哺乳动物细胞中的基因组编辑提供了一种十分简单的方法，可用来产生基因knockout（通过插入/缺失）或knockin（通过HDR）。在破坏基因功能时，向导RNA（sgRNA）产生，并指导Cas9核酸酶切割特定的基因组位置。Cas9诱导的双链断裂通过NHEJ修复通路来修复。这种修复容易出错，故插入和缺失被引入，破坏基因功能。

（图片来自Clontech）

Clontech公司近日推出Guide-it系列产品，能够在体外高效产生sgRNA，并检测sgRNA的切割效率，从而进一步改善CRISPR/Cas系统的可用性。

Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit通过体外转录，获得高产量的向导RNA（sgRNA），用于CRISPR/Cas研究。Guide-it sgRNA Screening Kit则让您能够在使用sgRNA之前，检验不同sgRNA的效率，这样就不会将低效的sgRNA导入细胞，浪费宝贵的时间。这个试剂盒可创建出包含sgRNA靶位点的模板，然后与待检验的sgRNA和重组Cas9核酸酶混合。通过琼脂糖凝胶电泳，即可测定Cas9核酸酶切割模板的效率。

Guide-it Complete sgRNA Screening System则是以上两个试剂盒的综合体。它包含体外转录sgRNA以及检验其效率所需的所有组分。通过下图，可以很清楚地了解每个试剂盒的功能。

此外，Clontech还推出了Guide-it Mutation Detection Kit，能够鉴定改造后基因组中产生的插入或缺失。此试剂盒利用Terra PCR Direct Polymerase，直接从细胞中扩增假定的目标序列，而无需提取基因组DNA。随后将扩增子变性并重新退火，而错配的DNA会被Guide-it Resolvase切割。通过凝胶电泳即可分辨切割和未切割的DNA片段。它不仅适用于CRISPR/Cas9系统，也同样适用于ZFN和TALEN。（生物通 余亮）

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