Caspase检测产品全接触（下）[选购宝典]

流式细胞仪上的caspase分析则带来了与“平均值”不一样的信息。当细胞依次通过流式细胞仪时，这些分析测定每个细胞的caspase活性，而不是所有细胞的平均反应。如果你想要确定表现出caspase活性的细胞比例，这种方法再适合不过了。

Life Technologies（赛默飞世尔旗下）的CellEvent Caspase-3/7 Green Flow Cytometry Assay Kit就实现了凋亡细胞中caspase 3/7的流式检测。此试剂盒中包含荧光底物CellEvent Caspase-3/7 Green Detection Reagent（名字好长，下面简称检测试剂）以及死细胞染料SYTOX AADvanced™ Dead Cell Stain。

这种检测试剂包括一个4个氨基酸的肽段（DEVD），带有核酸结合染料。它本身不发荧光，因为DEVD肽段抑制了染料与DNA的结合。然而，当凋亡细胞中的Caspase-3⁄7激活后，DEVD肽段被切割，让染料与DNA结合，并发出明亮的绿色荧光。染料与DNA结合后的发射波长为~530 nm，可利用标准的FITC滤光片观察。再结合使用死细胞染料，就能区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞。

流式分析的另一个好处是能够同时对单个细胞进行多项测定，例如，使用不同探针来检测caspase活性和细胞死亡标志物。这样，研究人员就能区分早中期凋亡和晚期凋亡的细胞。此外，他们还能区分表现出不同caspase活性的细胞，或同时分析线粒体膜电位的变化和caspase激活。

默克密理博的FlowCellect MitoCaspase Kit就提供了这样一种工具，让你能快速轻松地测定2个重要的参数：线粒体膜电位的变化和caspase 3/7的激活。这些参数的同时测定不仅有助于研究它们之间的相互关系，也能节省样品和分析时间，并保证结果更加精确。

此外，默克密理博还推出了专门的人类T细胞caspase分析：FlowCellect Human T Cell Caspase X Kit，这里的X指的是3/7、8或9。它通过人CD3、CD4和CD8抗体来实现T细胞的检测和鉴定，并区分表现出特定Caspase活性的CD4+ 细胞和CD8+ 细胞。这样，我们就能了解T细胞凋亡状态的全貌以及它对治疗的反应。整个分析可在90分钟内完成，在使用PBMC时只需单次孵育。

需要注意的是，尽管流式caspase分析也适用于贴壁细胞，但在样品制备过程中需要特别小心，因为有时会引发早期凋亡反应。

说了这么多，大家看得也有点累了吧。好吧，当当当当，现在有请女神登场。哦，这可不是一般的女神，而是默克密理博的Muse™智能触控细胞分析仪。它内置Pad版触屏式电脑，结合全面的预置细胞分析常规实验方案，为你开创前所未有的流式操作新体验。你只需动动手指，即可实现多种细胞分析。分分钟让你体验悦动指尖的细胞分析艺术。不信？那就请欣赏微电影：与女神一起实验的一天（One Day with Muse）。

Muse平台上的多个预置细胞分析方案已经推出，包括两种Caspase分析：Muse® Caspase-3/7 Assay Kit和Muse® MultiCaspase Assay Kit。

Muse® Caspase-3/7 Assay Kit实现了两个重要参数的快速测定：(1) 凋亡状态，即Caspase-3/7的激活以及(2) 细胞质膜通透性和细胞死亡。与传统的流式细胞仪相比，Muse的样品制备极其简单，一步混合后即可上机检测。直观的软件带来了活细胞、早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和死细胞的浓度及比例。怎么样，这个女神也不赖吧。当然，人家还获过著名的红点设计大奖呢。

当然，caspase活性虽然是凋亡的可靠指标，但世事无绝对，在caspase被抑制时，细胞仍然会发生凋亡。因此，在研究凋亡时仅仅测定一个参数是不够的。还是那句老话，最好采用两种或更多不同的方法来验证细胞的死亡方式。（生物通 余亮）

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