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让Western blot不再变化无常[新品推荐]

【字体: 时间:2015年01月12日 来源:生物通

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  GE Healthcare的Amersham WB系统集成了标准化的Western blot实验流程,包括电泳、转印、印迹和成像分析功能,有望大大减少实验中的差异,带来一致的、定量的蛋白质分析结果。这台完全一体化的系统由GE Healthcare位于瑞典乌普萨拉的蛋白科学卓越中心实验室研发,在2014年底上市。

Western blot虽然是蛋白质研究中最常用的技术之一,但想说爱它也不容易。这是一项非常不确定的技术。有时,忙上一天,最后什么结果也没有。有时,结果挺好,但再也重复不了。据统计,Western blot的实验差异性高达35-45%。这使得人们陷入了深深的忧虑:如何才能让Western blot的结果更加一致呢?

如今,这个问题有了一个很好的答案。GE Healthcare的Amersham WB系统集成了标准化的Western blot实验流程,包括电泳、转印、印迹和成像分析功能,有望大大减少实验中的差异,带来一致的、定量的蛋白质分析结果。这台完全一体化的系统由GE Healthcare位于瑞典乌普萨拉的蛋白科学卓越中心实验室研发,在2014年底上市。


 
图1. Amersham WB主机

Amersham WB由主机、软件和专属耗材组成。Amersham WB主机(图1)包括两部分:电泳扫描单元(左)和印迹单元(右)。电泳扫描单元主要负责SDS-PAGE以及凝胶或膜成像;而印迹单元则用于转印、杂交孵育和干燥。

有了Amersham WB系统,Western blot实验可在4小时之内完成,而无需一整天的漫长等待。无论你是开展传统的单色分析,还是定量的双通道分析,它都能搞定。下面我们就来看看Amersham WB系统是如何带来一致结果的。

第1步:电泳(42分钟)

在这一步中,电泳装置能够在恒定温度下提供高度均一的电流,再加上标准化的试剂和耗材,Amersham WB系统大大提高聚丙烯酰胺凝胶电泳的一致性。Amersham WB预制胶优化了浓缩胶和分离胶的区域,可带来出色的分辨率;而配套的电泳缓冲液条取代了液体缓冲液,使用方便且重复性好。这些特征让电泳步骤的变化降至最低程度,产生了容易定量和分析的条带。

GE Healthcare还提供了Amersham WB Cy5总蛋白标记试剂,可以很容易地预标记蛋白质,这样在电泳后无需染色即可直接检测总蛋白。利用Cy5总蛋白信号归一化目标信号,可以校正上样误差,而无需预先定量。

第2步:转印(30分钟)

从制作三明治,到蛋白质从凝胶转移到膜上,所有关键的参数和组件都经过标准化,有利于带来最佳的结果和最低的背景。Amersham WB PVDF卡设计巧妙,可避免用户误操作,而滤纸也已经切好,配合转印架的设计,减少出错的可能。在关闭转印架时,内置的滚筒可以去除气泡,增加重现性。内置的冷却也能保持恒定的温度,避免过热。

有了这一系列的措施,转印也能够高度重现,而不再需要担心实验间的差异。同时,你也不需要一次又一次地重复实验,从而节省时间,节省经费。

第3步:杂交(155分钟)

大家都知道,一抗很珍贵,因此都在想方设法少用一点。Amersham WB系统也能满足你的这个愿望。系统的高灵敏度以及步骤和组件的优化意味着你最多能节省50%的一抗。此外,一抗也能回收,用在后续的实验中。

封闭、洗涤、一抗和二抗孵育,这些繁琐的操作都由系统自动完成,而你所要做的只是加入一抗、二抗、封闭液和洗涤液,然后按下Start按钮。之后,你就可以抽身去做其他的事,或者去吃饭。不放心的话,还能通过手机上的Amersham WB Watch app来远程监控实验过程。

第4步:检测和成像(15分钟)

低荧光背景的PVDF卡,经过优化的荧光标记试剂,以及高性能的激光扫描仪,这些带来了高质量的定量数据。因此,你可以灵敏检测蛋白丰度的微小变化,分离和比较磷酸化与非磷酸化蛋白,并在同一块印迹上准确测定高丰度和低丰度蛋白。

德国癌症研究中心的Martin Teichert谈道:“因为它的动态范围很宽,所以不再有传统ECL的所有限制。突然,我们就能比较之前无法比较的样品。”

第5步:分析(1-2分钟)

对于数据分析而言,软件的方便好用至关重要。扫描一结束,Amersham WB软件自动开展数据分析,通过柱状图、泳道图和表格显示关键信息。它能显示所选择泳道和条带检测结果,定量目标蛋白相对杂质的百分比,并利用总蛋白或内参蛋白来归一化目标蛋白的信号。在你满意了分析结果之后,也能轻松导出这些可立即发表的图像和数据。

此外,Amersham WB软件也提供多种应用的标准化实验方案,比如蛋白组成和丰度的快速筛选,比较样品间蛋白质水平的定量分析。屏幕左侧显示正在运行的项目和参数,如有必要,可在屏幕右侧修改实验方案的默认参数。在整个Western blot过程中,大多数操作由仪器自动完成,你只需要做少量的准备工作,这个可以让手机上的Amersham WB Watch app提醒你。

现在,你不再担心Western blot的结果像抽奖了吧。通过这台智能的仪器,专属的耗材和精心优化的实验方案,你可以获得更加定量、更容易重现的Western blot数据。这样,你就能少一些重复,少一些优化,也少一些troubleshooting。关键是,对结果更有信心。(生物通 余亮)

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