让Western blot不再变化无常[新品推荐]

Western blot虽然是蛋白质研究中最常用的技术之一，但想说爱它也不容易。这是一项非常不确定的技术。有时，忙上一天，最后什么结果也没有。有时，结果挺好，但再也重复不了。据统计，Western blot的实验差异性高达35-45%。这使得人们陷入了深深的忧虑：如何才能让Western blot的结果更加一致呢？

如今，这个问题有了一个很好的答案。GE Healthcare的Amersham WB系统集成了标准化的Western blot实验流程，包括电泳、转印、印迹和成像分析功能，有望大大减少实验中的差异，带来一致的、定量的蛋白质分析结果。这台完全一体化的系统由GE Healthcare位于瑞典乌普萨拉的蛋白科学卓越中心实验室研发，在2014年底上市。

 
图1. Amersham WB主机

Amersham WB由主机、软件和专属耗材组成。Amersham WB主机（图1）包括两部分：电泳扫描单元（左）和印迹单元（右）。电泳扫描单元主要负责SDS-PAGE以及凝胶或膜成像；而印迹单元则用于转印、杂交孵育和干燥。

有了Amersham WB系统，Western blot实验可在4小时之内完成，而无需一整天的漫长等待。无论你是开展传统的单色分析，还是定量的双通道分析，它都能搞定。下面我们就来看看Amersham WB系统是如何带来一致结果的。

第1步：电泳（42分钟）

在这一步中，电泳装置能够在恒定温度下提供高度均一的电流，再加上标准化的试剂和耗材，Amersham WB系统大大提高聚丙烯酰胺凝胶电泳的一致性。Amersham WB预制胶优化了浓缩胶和分离胶的区域，可带来出色的分辨率；而配套的电泳缓冲液条取代了液体缓冲液，使用方便且重复性好。这些特征让电泳步骤的变化降至最低程度，产生了容易定量和分析的条带。

GE Healthcare还提供了Amersham WB Cy5总蛋白标记试剂，可以很容易地预标记蛋白质，这样在电泳后无需染色即可直接检测总蛋白。利用Cy5总蛋白信号归一化目标信号，可以校正上样误差，而无需预先定量。

第2步：转印（30分钟）

从制作三明治，到蛋白质从凝胶转移到膜上，所有关键的参数和组件都经过标准化，有利于带来最佳的结果和最低的背景。Amersham WB PVDF卡设计巧妙，可避免用户误操作，而滤纸也已经切好，配合转印架的设计，减少出错的可能。在关闭转印架时，内置的滚筒可以去除气泡，增加重现性。内置的冷却也能保持恒定的温度，避免过热。

有了这一系列的措施，转印也能够高度重现，而不再需要担心实验间的差异。同时，你也不需要一次又一次地重复实验，从而节省时间，节省经费。

第3步：杂交（155分钟）

大家都知道，一抗很珍贵，因此都在想方设法少用一点。Amersham WB系统也能满足你的这个愿望。系统的高灵敏度以及步骤和组件的优化意味着你最多能节省50%的一抗。此外，一抗也能回收，用在后续的实验中。

封闭、洗涤、一抗和二抗孵育，这些繁琐的操作都由系统自动完成，而你所要做的只是加入一抗、二抗、封闭液和洗涤液，然后按下Start按钮。之后，你就可以抽身去做其他的事，或者去吃饭。不放心的话，还能通过手机上的Amersham WB Watch app来远程监控实验过程。

第4步：检测和成像（15分钟）

低荧光背景的PVDF卡，经过优化的荧光标记试剂，以及高性能的激光扫描仪，这些带来了高质量的定量数据。因此，你可以灵敏检测蛋白丰度的微小变化，分离和比较磷酸化与非磷酸化蛋白，并在同一块印迹上准确测定高丰度和低丰度蛋白。

德国癌症研究中心的Martin Teichert谈道：“因为它的动态范围很宽，所以不再有传统ECL的所有限制。突然，我们就能比较之前无法比较的样品。”

第5步：分析（1-2分钟）

对于数据分析而言，软件的方便好用至关重要。扫描一结束，Amersham WB软件自动开展数据分析，通过柱状图、泳道图和表格显示关键信息。它能显示所选择泳道和条带检测结果，定量目标蛋白相对杂质的百分比，并利用总蛋白或内参蛋白来归一化目标蛋白的信号。在你满意了分析结果之后，也能轻松导出这些可立即发表的图像和数据。

此外，Amersham WB软件也提供多种应用的标准化实验方案，比如蛋白组成和丰度的快速筛选，比较样品间蛋白质水平的定量分析。屏幕左侧显示正在运行的项目和参数，如有必要，可在屏幕右侧修改实验方案的默认参数。在整个Western blot过程中，大多数操作由仪器自动完成，你只需要做少量的准备工作，这个可以让手机上的Amersham WB Watch app提醒你。

现在，你不再担心Western blot的结果像抽奖了吧。通过这台智能的仪器，专属的耗材和精心优化的实验方案，你可以获得更加定量、更容易重现的Western blot数据。这样，你就能少一些重复，少一些优化，也少一些troubleshooting。关键是，对结果更有信心。（生物通 余亮）

我想了解Amersham WB系统的更多信息