2014创新产品:CRISPR切口酶降低脱靶效应

【字体: 时间:2015年02月05日 来源:生物通

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  Cas9-D10A切口酶配合一对gRNA使用,可以减少意外的脱靶基因修饰。它分别在相对的两条DNA链上产生切口,从而形成功能性的双链断裂。这种设计能最大限度降低脱靶效应,同时保持高效而又特异的基因修饰。为此,CRISPR配对切口酶被生物通读者评为2014年度的创新产品。

过去6年,生物通一直在追踪生命科学领域最前沿的创新产品,将其介绍给大家。2014年,生物通继续搜罗新上市的产品,为大家奉上一场技术盛宴。经过一个半月的网页和微信投票以及专家评鉴,2014生命科学十大创新产品终于出炉。

在2014年,CRISPR基因组编辑技术无疑是一颗闪亮的明星。文章的接连发表,显示出CRISPR技术在科学研究和疾病治疗中的巨大潜力。然而,这种技术也并非完美,多项研究表明,CRISPR/Cas9系统可能存在脱靶效应。为了克服这一点,Sigma-Aldrich公司推出了改造的产品 – CRISPR配对切口酶。

Cas9-D10A切口酶配合一对gRNA使用,可以减少意外的脱靶基因修饰。它分别在相对的两条DNA链上产生切口,从而形成功能性的双链断裂。这种设计能最大限度降低脱靶效应,同时保持高效而又特异的基因修饰。为此,CRISPR配对切口酶被生物通读者评为2014年度的创新产品。

此前,Broad研究院的张锋博士曾在《Cell》杂志上发表文章,证实Cas9切口酶突变体的使用能降低CRISPR/Cas9系统的脱靶效应1。在那项研究中,通过配对切口,基因组编辑的脱靶效应被降低50-1500倍。作者认为,这种策略可应用于需要高特异性的基因组编辑研究。

如今,Sigma-Aldrich公司CRISPR配对切口酶的上市,让研究人员也能享用到这一成果。大家可能比较关心,如何设计和订购这一产品。Sigma-Aldrich目前提供预制的CRISPR/Cas9产品,覆盖人、大鼠、小鼠的编码基因。大家可联系客服或在网上进行选择和订购。网址如下:https://crispr.sigmainformatics.com/CrisprSearch.php。当然,大家也可以定制自己的CRISPR/Cas9产品。

在基因组编辑领域,Sigma-Aldrich一直敢为人先。多年前,它就率先推出了基因组编辑工具锌指核酸酶(ZFN)。CRISPR/Cas9是Sigma-Aldrich公司推出的新一代基因组编辑工具。随着技术的发展和应用,Sigma不断更新和完善CRISPR产品,以满足广大客户的需求。

• Cas9/gRNA单质粒系统

Cas9和gRNA构建在单个载体上,提高转染效率;此外,GFP与Cas9共表达,可实现对阳性细胞的富集;优化配置的启动子则可大大提高gRNA和Cas9在细胞内的表达效率。

• Cas9-D10A双切口酶系统

改造的Cas9-D10A配合使用一对gRNA,利用双切口酶活性增强识别特异性,最大限度地降低脱靶效应。

• 高度纯化的RNA系统

纯化的gRNA和Cas9 mRNA直接用于胚胎显微注射,可避免启动子不兼容性和质粒随机整合的风险,尤其适用于胚胎注射以及对dsDNA敏感、存在启动子细胞不兼容的细胞。

除此之外,Sigma还可提供适合各类CRISPR产品的阳性和阴性对照,以及详细的技术介绍和应用说明,保证您的工作更简化、更高效。

我想了解Sigma-Aldrich的CRISPR/Cas9产品

参考文献

1. F. Ann Ran, Patrick D. Hsu, Chie-Yu Lin, Jonathan S. Gootenberg, Silvana Konermann, et al. Double Nicking by RNA-Guided CRISPR Cas9 for Enhanced Genome Editing Specificity. Cell, Volume 155, Issue 2, 10 October 2013, Pages 479-480

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