用户名:

密 码:

测序 | miRNA | 表观遗传 | 蛋白研究 | 细胞研究 | 免疫学 | 转染 | PCR | qPCR | 核酸纯化 | 基因表达

您所在的位置:首页 > 新技术专栏

单细胞表观遗传学研究指南(上)

【字体: www.ebiotrade.com 时间:2015年2月9日 来源:生物通

摘要:

  The Scientist最近撰文详细介绍了单细胞表观遗传学研究中的一些关键技术。这些技术可以帮助我们在单个细胞中检测DNA、组蛋白和染色质水平上的表观遗传学修饰。

分享到:
  

生物通报道:随着测序成本的直线下降,解读一个生物的基因组正在逐渐成为研究者们的日常工作。然而,并不是所有细胞都能够达到测序要求,测序一般需要几千到一百万细胞。举例来说,如果你研究的是早期胚胎发育,那么可用的细胞数量就很少。

在这种情况下每一个细胞都很宝贵,新加坡A*STAR分子与细胞生物学研究院的Daniel Messerschmidt说。为了研究早期胚胎中的表观遗传学修饰,Messerschmidt及其同事开发了一个能够在单细胞中分析DNA甲基化的新技术。这项发表在Science杂志上的成果,使Messerschmidt成为了单细胞表观遗传学领域的先行者。(原文:Single-cell DNA-methylation analysis reveals epigenetic chimerism in preimplantation embryos

除了研究稀少细胞中的基因表达,单细胞表观遗传学检测技术还有着很大的应用空间,比如说可以用来研究细胞异质性很大的肿瘤。发育早期的表观遗传学错误能够影响终生,很可能引发疾病。另外,健康组织中也存在着表观遗传学多样性。“以往的生物学教条是,我们从父母继承到的基因组在所有细胞里是始终如一的,”单细胞基因组学专家,Leuven大学副教授Thierry Voet说,但现在这一观点已经被颠覆。

The Scientist最近撰文详细介绍了单细胞表观遗传学研究中的一些关键技术。这些技术可以帮助我们在单个细胞中检测DNA、组蛋白和染色质水平上的表观遗传学修饰。

分离单细胞

在进行单细胞表观遗传学分析之前,你需要先确定自己拿到了正确的细胞或细胞类型。

如果你想要的细胞已经处于悬浮状态(比如循环肿瘤细胞),而且含量相对比较丰富,那么流式细胞分析将是你的理想选择。如果你的样本是实体组织,那么可以用酶分解掉胶原和其他细胞外蛋白。不过酶学消化对细胞影响较大,甚至可能改变基因转录情况,Voet提醒道。在把组织细胞制成悬液之后,我们就可以通过特异性的荧光标签分离出自己想要的细胞。进一步深入单细胞是比较棘手的一步,可能需要用到微流体设备,尤其是在细胞量较少的时候。

适用于任何流式细胞实验室,Attune® NxT 声波聚焦流式细胞仪,索取免费技术资料>> >>

将细胞分散到悬液中,会失去它们在组织里的位置信息。如果你想要了解单个细胞的邻居和环境线索,你就需要使用激光捕获显微切割技术。这种技术可以通过扫描组织切片,定位你想要研究的细胞,并将其提取出来。操作者需要非常小心,不要切到目的细胞流失含有RNA的细胞质,或者切掉部分细胞核,Voet指出。

数量最为稀少的细胞只能用毛细管等器具手动获取。分离到细胞之后,我们就可以进行表观遗传学分析了。现有技术一次只能进行一种类型的单细胞表观遗传学分析,你需要决定自己研究的是DNA、组蛋白还是染色质水平上的标签。

甲基化标签

DNA的胞嘧啶甲基化是一种经典的表观遗传学标签,这种标签通常意味着被沉默的基因组区域。之前人们一直在用重亚硫酸盐测序来进行甲基化分析,这是一种相当严酷的化学方法,主要是把所有未甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶。经过PCR富集,这些改变用二代测序很容易检测出来。近来,一些研究团队将这一技术发展到了单细胞水平。

上一页 [1] [2] 下一页

(http://www.ebiotrade.com/)
版权所有,未经书面许可,不得转载

我来说两句(0)

[Ctrl+Enter]

加载读者评论......

相关文章:

    加载相关文章......

今日文章:

    加载今日文章......
  • eBiotech
  • 生物通快讯
    加载中......
    加载中......

技术期刊

GE期刊 | 基因快讯

    加载中......
    加载中......

更多>>

技术大讲堂

分子 | 细胞 | 蛋白 | 其它

    加载中......
    加载中......
    加载中......
    加载中......

更多>>

特价专栏

    加载中......

更多>>

会展信息

    加载中......

更多>>

生物通首页 | 生物通首页 | 今日动态 | 生物通商城 | 人才市场 | 核心刊物 | 特价专栏 | 生物直通车 | 科研交流 | 正牌代理商 | 中国科学人 | 新技术专栏 | 技术讲座

版权所有 生物通

Copyright© eBiotrade.com, All Rights Reserved

联系信箱:

粤ICP备09063491号