如何加速你的Western Blot实验

　　

——小叮当口袋里的各种法宝令Western blots操作更快，更敏感，也更可靠

生物通报道：Western blot技术已经成为了蛋白研究方面的一种主要技术，研究人员可以利用Western blot定性，甚至半定量的识别组织和培养细胞中的蛋白，这种操作实验可以说每天都会在实验室里上演，但同时，Western blot等blot技术也是各种审议的主题，学术造假，以及一些研究成果被退回的原因。

近年来Western blot技术也有了一些发展，一些新的试剂和仪器令Western更为敏感，一些主要步骤（电源，转膜等）也更为精简，虽然许多研究人员仍然使用的是化学发光法检测法和X光胶片，但一些新的技术，如数字荧光成像技术已经提高了这种工具的敏感性和可靠性，令其进入了“定量时代”。一些新的技术方法也能令Western blot可以用于单细胞检测，或者对有限及珍贵的样品进行检测，其中的一些步骤也实现的自动化。

上文：Western Blot实验操作进阶技巧（一）

实验操作加速

从开始到结束，传统的Western blot操作需要大约两天半的时间，如果还要重做，加上样品量很大的时候，真是会让人崩溃。“我要做许多WB实验，检测所有的样品，这真是费时费力，”来自加州大学旧金山分校的博士后研究员Jillian Silva说。

为此Silva修改了Western blot的实验操作流程，让时间缩短到一天完成。首先她将SDS-PAGE 凝胶换成了Bis-Tris 系统，这样跑胶的时间就缩短到了35分钟（而PAGE胶需要1.5-2个小时），并且这一系统也能提高检测的灵敏度。其次Silva购买了一套新的blotting系统，也就是 iBlot 系统——能在7分钟内完成转膜，而传统方法需要1-2个小时。（大家可以 在此处咨询相关国内技术人员 >> >>）

第三，也就是最重要的一点，她采用了不同于传统化学检测方法的荧光检测方法：LI-COR的 Odyssey系列产品，这一系统采用近红外荧光技术，降低背景荧光，提供比可见光谱荧光更高的信噪比，且灵敏度与化学发光相当，而且升级后的Odyssey增添了自动扫描功能，无需摸索激光强度。

欢迎索取Odyssey检测系统的详细资料

从使用感受上来说，Silva说这一系统有两个激发波长：700nm和800nm，所以可以在同一个膜上检测两种不同的蛋白，“这一点用处很大，因为这样我就能同时跑两种不同蛋白了，”她说。

如何入门：

Silva 和其他几个实验室共享了她的实验操作方法，一些实验室也发表了相关的论文（the Journal of Visualized Experiments ，e51149, 2014），刚开始他们还有些犹豫，不想采用荧光检测的方法，但是一旦开始用上了这种方法，就会爱不释手了。不过在最开始上手的时候，还需要一些调整，如缓冲液的用量，抗体温孵的时间等，她表示这些都有助于提高速度和灵敏度。

费用：

每个Bis-Tris 胶为 14.50美元（当地价格），iBlot 2 Gel Transfer Device设备为1,996美元（当地价格），LI-COR Odyssey Infrared Imaging System价格为3-6万美元（当地价格），国内价格请具体询问各厂家。在此处咨询相关价格>> >>

注意事项：

时间节省来自于成本的增加，Silva 估价称大约每次实验要多花费20美元（当地价格），但是如果考虑到人员成本、动物维护费用等等的时间和精力，而且荧光成像无需化学显影，定影等相关的费用（在Silva的实验室这个花费约为324 美元/年），Silva觉得还是划得来的。

 

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