金标准的miRNA检测如今又升级[新品推荐]

TaqMan Assay一直被认为是荧光定量PCR分析的金标准，而qPCR分析又被认为是miRNA检测的金标准。当金标准遇上金标准，那自然是“你值得拥有”。如今，TaqMan MicroRNA Assay家族又添一新成员。赛默飞世尔科技推出了高级版的miRNA分析——TaqMan Advanced miRNA Assay。

TaqMan Advanced miRNA Assay包含预先配好的引物和探针组合，可检测和定量生物样本（主要是人类）中的成熟miRNA。配合新的TaqMan Advanced miRNA cDNA Synthesis Kit使用，此系统可同时分析单个样本中的多个miRNA靶标，并具有出色的灵敏度和特异性。

整个检测流程也大大简化。样本制备好之后，在miRNA的3’端加上poly(A)尾巴，而5’端连接一个接头序列，开展逆转录。接着，利用通用的引物和预混液对cDNA进行预扩增，均匀地增加每个靶标的cDNA量，维持相对的差异表达水平。之后就是利用qPCR来定量每个miRNA靶标。这样看来，只需一次RT反应，就能分析多个miRNA。

这个系统的优势之一就在于出色的灵敏度，适用于RNA量有限的血清和血浆样本。与传统的预扩增不同，此次采用的miR-Amp引物能识别添加在每个miRNA 5’和3’端的通用序列，从而避免扩增偏向。据介绍，TaqMan Advanced miRNA Assay能准确检测1 pg总RNA或2 µL血清/血浆中低至60个拷贝。

大家都知道，有些亲缘关系接近的mIRNA仅相差一个碱基，因此检测工具必须能区分这些高度相似的靶标。研究已经证明，TaqMan Advanced miRNA Assay能够区分let-7 miRNA家族成员，且几乎没有交叉反应性。对于miRNA 5’端高度保守的种子区域，此分析表现出卓越的特异性，即使相差一个碱基，也能很好区分。

此外，TaqMan Advanced miRNA Assay也延续了TaqMan Assay极佳的重复性和宽的动态范围。据介绍，此分析能检测6-log动态范围内的miRNA靶标，而重复性的改善也有利于少量miRNA靶标的检测。

目前，经典的TaqMan MicroRNA Assay仍在出售。这两者有何不同？请看下表。

	TaqMan MicroRNA Assay	TaqMan Advanced miRNA Assay
描述	在cDNA合成过程中采用靶标特异的茎环引物，产生qPCR的模板	采用通用的逆转录步骤和通用的miR-Amp步骤，实现高度灵敏的检测
逆转录	miRNA特异的RT	通用的RT
通量	适合1-10个靶标	适合 >10个靶标
覆盖	205个物种	关注人类miRNA
形式	单管、TaqMan array卡片和板、OpenArray的形式	单管；其他请咨询

（生物通 余亮）

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