新型促凝血RNAi疗法为血友病治疗带来曙光

　　

RNAi（RNA interference）技术自诞生之日，就表现出巨大的疾病治疗应用潜力，每年全球多家巨型药企都会投入巨额资金进行RNAi治疗药物研发，Alnylam就是其中之一。最新一期Nature Medicine中报道了该公司与费城儿童医院关于血友病的RNAi疗法最新研究进展。

在血液中，抗凝血因子和促凝血因子会组成一个凝血系统，通过控制血浆中凝血酶的水平，平衡失血控制与血栓形成之间的关系。凝血酶是凝血级联反应过程中的关键酶，它通过将纤维蛋白原转换成纤维蛋白促进凝血。凝血系统突变会引起凝血酶缺陷，引发血友病，且这种突变是可遗传的。

本项研究中，研究者为了达到促凝血目的，选择抗凝血酶（antithrombin，AT）作为目标设计siRNA药物。AT是一种关键性天然抗凝剂，是凝血酶和FXa最主要的内源性抑制剂，抑制AT可以提升凝血酶水平，促进凝血。

 
凝血系统示意图 本研究针对图中凝血酶（Thrombin）抑制剂AT设计ALN-AT3

基于已有报道，研究者靶向SERPINC1转录本设计了一种携带有GalNac（N-acetylgalactosamine，乙酰半乳糖胺，一种糖蛋白受体配基）共轭修饰的siRNA—ALN-AT3。GalNAc-siRNA可以皮下注射，持续药效长。研究者首先在小鼠中对ALN-AT3药效进行了评估，结果发现，以10mg/kg的剂量，按照单剂量给药模式给野生小鼠注射ALN-AT3，可在28天内都对保持80%以上的AT沉默效率，而在多剂量给药模式下，按照0.75mg/kg的剂量注射ALN-AT3就足以维持80%以上的AT沉默效率。这些结果表明，在小鼠模型中ALN-AT3达到了预期沉默效果。接着分别以0.3、1和3mg/kg的剂量给血友病A小鼠连续注射3个星期ALN-AT3后，AT水平分别降低到30%、70%和90%，APTT（activated partial thromboplastin time，即活化部分凝血活酶时间）恢复正常。在微脉管激光创伤和隐静脉两个血友病A小鼠模型出血实验中，ALN-AT3也明显减少了止血时间。另外，即便将ALN-AT3注射剂量升级到500mg/kg，血友病A小鼠连续注射数周也并未出现不良临床症状，表明ALN-AT3毒性较小。

 
血友病A小鼠多剂量注射ALN-AT3后血液内血小板和纤维蛋白聚集情况 ALN-AT3明显提高了单位面积内血小板和纤维蛋白聚集量

研究者接着在非人类灵长类动物食蟹猴模型中进一步检测ALN-AT3药效。结果发现，以30mg/kg剂量进行单剂量模式注射，正常食蟹猴体内AT沉默效率可以达到90%，持续超过58天；若按照多剂量给药模式注射，只需要1.5mg/kg剂量就几乎可以完全沉默AT蛋白，促进凝血酶生成。

 
食蟹猴多剂量注射ALN-AT3后AT及凝血酶水平变化 当诱导食蟹猴出现血友病症状后，ALN-AT3明显降低了血液中AT，同时提升了凝血酶水平

本项研究所开发的ALN-AT3具有很大的发展潜力，有可能改善目前血友病临床治疗的诸多缺陷。目前，该RNAi药物已进入临床I期实验，研究者希望通过更多临床研究，进一步确认ALN-AT3在人体内的药效，优化ALN-AT3设计，结合人基因组数据，更好地治疗血友病，同时将此种技术更多地应用于其他血液病治疗中。

在2015年第三届广州核酸国际论坛中，Alnylam公司副总裁Laura Sepp-Lorenzino将作为演讲嘉宾，为大家介绍该公司在血友病等其他疾病RNAi疗法方面的最新进展，欢迎相关领域研究人员参会交流！

相关文献：Sehgal A, Barros S, Ivanciu L, et al. An RNAi therapeutic targeting antithrombin to rebalance the coagulation system and promote hemostasis in hemophilia[J]. Nature medicine, 2015.