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Western blot抗体选购有讲究[心得点评]

【字体: www.ebiotrade.com 时间:2015年7月2日 来源:生物通

摘要:

  抗体毁了你的western blot实验?亲,你并不是孤单的一个人。有时,你会发现新一批次的抗体无法再现之前的结果。有时,你甚至发现抗体根本不能与目标蛋白结合。钱花了不说,时间也一去不复返。如何选择适当的WB抗体,让Bio-Rad的专家来教你几招。

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抗体毁了你的western blot实验?亲,你并不是孤单的一个人。有时,你会发现新一批次的抗体无法再现之前的结果。有时,你甚至发现抗体根本不能与目标蛋白结合。钱花了不说,时间也一去不复返。如何选择适当的WB抗体,让Bio-Rad的专家来教你几招。

1. 根据应用来购买

抗体是一个通用的工具,但它们本身也有局限性。有些抗体无法结合变性的蛋白,这就让它在western blot中表现很糟。你要购买的产品最好是经过western blotting的验证,有数据做支持。如果只有几篇文献,那要小心,因为它通常只显示了目的条带,而不清楚是否有非特异的条带。

2. 查看所有的数据

供应商的网站通常列出了抗体的应用以及引用的文献,你应该一篇一篇地去看。如果在选购时参考的数据不多,那么实验可能会有风险。

3. 并非所有验证都相同

一些供应商会明明白白地告诉你它们如何验证抗体。为了节约时间和成本,许多公司并没有验证每一批的抗体,因此批次之间可能存在相当大的差异。有些公司在验证中使用过表达的蛋白来证明抗体能够与目的蛋白结合。由此产生的数据并不能很好地说明抗体在western blot中表现如何。抗体若是经过全细胞裂解液以及各种样品的检验,每一批都是如此,那么就值得购买。

4. 使用第三方资源

一些机构,如CiteAb,提供了抗体引用的数据库。而另一些自己开展检测,并公开他们的数据。不过,尽管他们综合了大量的数据,但这往往来自单一来源,通常是二手的。因此,你需要检查这些信息是否与供应商网站上的一手数据一致。

5. 看看有没有试用装

许多公司现在提供小包装的抗体,让你大胆尝试,再决定是否购买大包装。这可是个好机会,既能验证抗体是否适合你的实验,又不用担心浪费太多钱。

6. 做好优化的准备

供应商的验证并不能完全取代内部的检验。你的样品不同,操作步骤也不完全相同。而这些因素都会影响抗体的表现,因此需要将你的western blot与抗体的验证分开而论。你的研究,最终还是需要你来把关。

7. 最终原则

无论你是采购还是使用抗体,你都必须记住抗体技术存在缺陷,它们可能会有变化。在选择抗体时需要严谨。尽可能使用阳性和阴性对照,控制你自己的偏见,确保你的western blot能提供正确的答案。(生物通 薄荷)

了解Bio-Rad经过验证的western blot抗体

(http://www.ebiotrade.com/)
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